[发明专利]一种作为A群链球菌四价疫苗保护性抗原的重组多肽

说明书

技术领域

本发明涉及DNA重组技术和疫苗药物领域，更具体讲，本发明涉及一种重组多肽，该重组多肽可作为主要针对我国广东省流行的可引起风湿热的A群链球菌四个血清型的四价疫苗的保护性抗原，编码该重组多肽的DNA序列，含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞，DNA重组技术制备该重组多肽的方法，以及该重组多肽在A群链球菌疫苗研制中的应用。

背景技术

A群链球菌是临床上最常见的致病性革蓝氏阳性菌之一。A群链球菌通过空气飞沫、皮肤接触等方式传播可引起多种感染性的疾病。在所有A群链球菌引起的疾病中，以A群链球菌上呼吸道感染导致的急性风湿热和由此诱发的风湿性心脏病的危害最为严重，研究表明，约3％的未治疗的儿童咽炎可能发展为风湿热，并最终导致风湿性心脏病。导致该病的原因是由于部分血清型的A群链球菌与人体心肌组织存在共同抗原，A群链球菌感染后可引起自身免疫性疾病。根据世界卫生组织的报道，全球每年517000人死于因链球菌感染所致的各种疾病，其中2/3死于链球菌感染后所致的风湿热、风湿性心脏病、急性肾小球肾炎等疾病。近年来，虽然抗菌素广泛使用，但A群链球菌感染在一些发展中国家仍然十分严重。我国八五期间进行的A群链球菌的流行病学调查发现，我国学龄儿童A群链球菌上呼吸道年平均感染率达50％，部分农村地区A群链球菌感染率高达70％～80％。保守估计，我国因A群链球菌感染导致的风湿性心脏病患者在250万以上，高额的手术和终身治疗费用给患者家庭和社会造成了严重的经济负担。因此，研制一个主要针对A群链球菌多价疫苗非常必要。

A群链球菌血清型众多，根据其细胞壁M蛋白抗原的不同，可分为约150多个血清型，并且各血清型之间缺乏交叉保护，因此很难研发一种针对所有流行毒株的疫苗。同时，部分血清型的A群链球菌M蛋白抗原与人类组织蛋白存在交叉抗原。因此，传统的菌体疫苗或亚单位疫苗可能导致人体的自身免疫反应。到目前为止，全世界仍然没有一个安全有效的A群链球菌疫苗上市。

M蛋白是A群链球菌菌体表面的主要毒力因子，有抗吞噬作用，机体感染A群链球菌后产生的抗M蛋白的抗体是保护性抗体，自然感染后能持续存在30多年。近年来的研究发现，M蛋白基因(emm)编码的多肽C末端为高度保守，N末端高度变异，是A群链球菌型特异性的基础；N端由A、B、C三个重复片段组成，产生型特异性的保护性抗体的抗原决定簇位于A区，产生与人体组织交叉反应的抗原决定簇位于B区、B-C区的侧翼、A-B区的侧翼。(Alan L.Bison，Fran A.Rubin，P.Patrick Cleary and James B.Dale Clinical InfectiousDiseases 2005；41：11501156)因此，以M蛋白A区为基础设计针对A群链球菌不同血清型的疫苗既避开了人体产生交叉反应的区域，又可使机体产生保护性抗体，是A群链球菌疫苗研制的一个可行的方法。

研究表明，A群链球菌的M蛋白是由两条完全为α-螺旋结构的多肽链构成的同源二聚体蛋白，空间结构为线性分子。因此，其抗原表位应为线性的抗原表位，不具有复杂的空间构象。将不同血清型A群链球菌M蛋白A区含有保护性表位，不含人体交叉反应表位的氨基酸序列串联连接后形成的人工设计的多肽应和天然M蛋白具有相似的空间结构，并且不会破坏原有的抗原表位。

欧美发达国家经长期的研究已确认致风湿热原性的A群链球菌M分型主要集中在M1、3、5、6、14、18、19、24、27和29等10个血清型。2004年广东省心血管病研究所在国内首次报道了在广东省和我国其他部分地区分离的104株A群链球菌的M蛋白emm基因分型的结果，主导血清型是emm1、18、12、69、110等型，其中emm1型占29.8％，emm18型占9.6％。这两个血清型均为风湿热原性的A群链球菌(陈志红，龚守芳，董太明等.应用emm基因序列分析对104株链球菌分型.中华微生物学和免疫学杂志，2004，24(6)：489-491.)。2008年广州市儿童医院陈兆鸿等报道的广州地区儿童感染A群链球菌87株的emm基因分型也证实了以上结果(陈兆鸿，谢国强，邓秋连等.广州地区儿童感染A群链球菌87株的emm基因分型.广东医学，2008，29(4)583-584.)。

发明内容