[发明专利]高效液相色谱-浊点萃取测定阿维菌素和伊维菌素含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有效的新型浊点萃取体系分离富集阿维菌素和伊维菌素的方法，属于分析化学中痕量生物大分子的分离富集和分析测定技术领域。

背景技术

浊点萃取(Cloud Point Extration，CPE)是近年来出现的一种新兴的液一液萃取技术，它不使用挥发性有机溶剂，不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，通过改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离。同经典的液一液萃取技术相比，该萃取技术具有如下优点：(1)应用范围广，萃取效率高，富集因子较大；(2)不使用有毒、有害的有机溶剂，适应了绿色分析技术发展的需要，而且所需的表面活性剂的量仅为mg级，从而可以把对环境产生污染的有机物质控制在最低限度；(3)操作简单方便；(4)易于与一些仪器分析方法联用等。该技术最早由Watanabe(Watanabe H，Tanaka H，Talanta，1978，25：585-589)等提出，用于金属螯合物合物的分离，Bordier(Bordier TM，Biol.Chem.，1981，256：1604-1607)等最早将其应用于生物学领域，用于生物大分子的分离纯化。

浊点萃取技术其基本原理为：在一定温度范围内，表面活性剂易溶于水成为澄清的溶液，而当温度升高(或降低)到一定程度时，表面活性剂在水中的溶解度反而减小，会在水溶液中出现混浊、析出或分层的现象。这种混浊溶液静置一段时间(或离心)后形成两液相，一相为量少为富含被萃取物的表面活性剂相，另一相为大量且表面活性剂胶束浓度为临界胶束浓度的水相。上述过程是可逆的，当温度向着相反方向变化时，即可恢复为均相溶液。在两性离子表面活性剂体系中，当温度低于浊点温度时会引发分相分离，而当温度高于浊点温度则成为均相溶液，而在非离子表面活性剂体系中正好相反。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效的新型浊点萃取体系分离富集阿维菌素和伊维菌素的方法。本发明高效液相色谱-浊点萃取测定阿维菌素和伊维菌素含量的方法，其特征在于：采用Trionx-114为表面活性剂，并结合高效液相色谱进行测定：其主要步骤为：a.设计确定最佳浊点萃取条件；其中包括有(1)pH值的选择，(2)Trionx-114浓度的选择，(3)水浴温度和时间的选择；b.在上述最佳条件下对阿维菌素和伊维菌素测定和研究；c.在上述最佳条件下并结合高效液相色谱法进行水样中痕量阿维菌素和伊维菌素含量的测定。

本发明方法可延伸用于测定除水之外的条件环境样品、食品和药物分析中的阿维菌素和伊维菌素的测定。本发明方法的优点如下：(1)本发明提供了一种新的浊点萃取体系，实验证明本发明方法能有效地富集阿维菌素和伊维菌素，且本方法安全、简便、快捷和高效。(2)本发明的浊点萃取体系富集后的所得的富集因子较大，且与高效液相色谱法结合后所有效地提高该仪器的测定灵敏度，获得理想的检出限。

具体实施方式

现将本发明的具体实施例叙述于后。

实施例1本实施例中主要是通过项实验来获得数据的。本实施例的实验步骤如下：(1)设计确定最佳浊点萃取条件准确移取标准溶液至50ml离心管中，依次加入定量表面活性剂TrionX-114，用二次蒸馏水定容至50mL。摇匀后恒温水浴，加热一定时间后，趁热离心3,500r/min分离5min，在冰浴中冷却至接近0℃，使表面活性剂相变成粘滞的液相后弃去水相，然后向表面活性剂富集相中加入一定量的含甲醇或乙腈，用高效液相色谱-紫外检测器测定所加阿维菌素和伊维菌素的含量。按照所设定的实验步骤，优化浊点萃取的实验条件如下：①pH值的选择；②TrionX-114用量的选择；③水浴温度和时间的选择。(2)在上述最佳实验条件下对阿维菌素和伊维菌素的分析特性进行测定和研究。(3)在上述最佳实验条件并结合高效液相色谱法进行水样中痕量阿维菌素和伊维菌素的含量测定。本实施例中所测结果如下：

A、按照(1)中所述实验室步骤寻找测定阿维菌素和伊维菌素的最优实验条件：检测波长为245nm，流动相流速为1.5ml/min，其中阿维菌素的保留时间为6.4分钟，伊维菌素的保留时间为13.0分钟。阿维菌素和伊维菌素的优化实验条件总结归纳见表1。