[发明专利]三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及三聚氰胺胶体金免疫层析检测技术领域，更具体本发明涉及一种三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸，同时还涉及三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，该制备方法同样适用于三聚氰酸等其他三嗪类含氮杂环有机化合物的胶体金免疫层析检测试纸的制备。

背景技术

三聚氰胺(英文名Melamine)，简称三胺，又叫2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺、2，4，6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，是重要的氮杂环有机化工原料。白色结晶粉末，无味。这种化学品常被用于生产塑料、胶水和阻燃剂，在部分亚洲国家，它也被用以制造化肥。它是一种禁止用于宠物食品及动物饲料的化学物质，动物食用后可以使动物发生肾衰竭并导致死亡。

在食品工业中，因为需要测定食品的蛋白质含量，而直接测量蛋白质技术上比较复杂，所以通常采用凯氏定氮法测定蛋白质含量，即通过测定食品中氮的含量来间接推算蛋白质的含量。由于三聚氰胺与蛋白质相比含有更多的氮原子，所以添加在食品中的三聚氰胺可以造成食品蛋白质含量较高的假象，因而被不法商贩所利用。三聚氰胺被摄入人体后，通过小肠吸收进入血液循环并最终进入肾脏，形成肾结石，尤其对于哺乳期的婴儿，更容易造成结石。

三聚氰胺的检测目前主要采用仪器检测的方法。主要方法有：GC-MS法、Spectra-Qμad在线检测、超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法、反相高效液相色谱法、高效液相色谱-二极管阵列法、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-四极杆质谱联用、固相萃取与高效液相色谱联用、液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)等。这些仪器方法价格昂贵，且方法操作复杂，需受过专门训练的人员才能操作，而且存在着适用范围窄、设备昂贵、成本高等问题。酶联免疫试剂盒检测方法也需要有完善的实验室，有经验的技术人员，复杂的仪器设备，且检测过程繁琐，存在检测时间长等缺点。不适应现场大量样本的快速筛查。

目前还没有一种特异性强、灵敏度高、且操作简单方便、适宜快速的现场检测和大规模普查要求的乳制品中三聚氰胺检测方法。为解决现有技术的不足，本发明提出了一种特异性强、灵敏度高，且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的三聚氰胺快速试纸检测方法，为开展三聚氰胺快速现场检测和大规模普查提供了方便。该技术的关键是抗三聚氰胺单克隆抗体的制备和三聚氰胺免疫层析试纸的制作。

目前，利用单克隆抗体进行三聚氰胺的竞争胶体金快速检测方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸，检测试纸特异性强，准确率高，重复性好，且检测快速，操作简便，无需特殊的设备和仪器，携带方便，可在常温下保存，保存期可达1年。

本发明的另一个目的是在于提供了一种三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，此方法利用抗三聚氰胺单克隆抗体作为金标探针，特异性强，灵敏度高，结合胶体金标记技术，使检测方法快速，简便。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸，包括胶体金标记的鼠抗三聚氰胺单克隆抗体，羊抗鼠IgG抗体，聚乙烯板，聚氯乙烯衬膜，玻璃纤维纸，聚酯膜，免疫层析膜和吸水纸组成。试纸水平面自下而上依次为：样品吸收区、金标单抗区、固相化抗原和抗体区、吸水区，试纸水平面自下而上依次为：样品吸收区、金标单抗区、固相化抗原和抗体区、吸水区，其特征在于：样品吸收区铺设的为在聚乙烯板及聚氯乙烯衬膜上铺设玻璃纤维膜；金标单抗区为：将胶体金标记的抗三聚氰胺单克隆抗体均匀的喷洒于单位面积的聚酯膜上；固相化抗原和抗体区为：将三聚氰胺抗原和羊抗鼠IgG纯化抗体分别固定在单位面积的免疫层析膜上；吸水区为吸水纸。玻璃纤维膜上依次铺设金标探针结合垫和硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上包被检测线和对照线，检测线侧贴有金标探针结合垫，对照线侧贴有吸水滤纸，其中检测线包被的是三聚氰胺，对照线包被的是羊抗鼠IgG纯化抗体，三聚氰胺合适包被量为0.5-10μg，金标探针合适抗体标记量为2-40μg/ml，羊抗鼠IgG纯化抗体合适包被量为1-10μg蛋白。

其中样品吸收区对应的是聚乙烯板及聚氯乙烯衬膜及铺设玻璃纤维膜，金标抗体区对应的是金标探针结合垫，固相化抗原抗体区对应的是硝酸纤维素膜及包被的被检测线和对照线，吸水区对应的是吸水滤纸。

三聚氰胺胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其步骤是：