[发明专利]一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。

背景技术

α-L-岩藻糖苷酶(Fucosidase，AFU，α-L-岩藻糖苷-岩藻糖水解酶，EC3.2.1.51)属溶酶体酸性水解酶类，存在于人体肝、脑、肺、肾、胰、纤维细胞和白细胞等的溶酶体内，血清及尿液中亦含有一定量的酶。AFU的主要生理功能是参与含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子的分解代谢。遗传性AFU缺乏症患者，从上述生物大分子中水解岩藻糖基的反应受阻，引起岩藻糖蓄积病，患儿多在5～6岁死亡。血清AFU测定，过去主要用于岩藻糖蓄积病的诊断，80年代以来，国内外有许多文献报道，在肝细胞癌时，血清AFU活力升高，其敏感性及特异性均较好，尤其对甲胎蛋白阴性肝细胞癌与肝脏其他占位性病变的鉴别诊断有着重要的临床参考价值

血清AFU作为原发性肝癌诊断的一个新标记物，其敏感性和特异性良好。迄今血清甲胎蛋白水平测定仍是原发性肝癌临床诊断最特异的肿瘤标记物，然而，在甲胎蛋白阴性的原发性肝癌病例中，大约有70～85％出现AFU阳性结果，而且小肝癌(肿瘤直径＜3CM)患者血清AFU的阳性率高于甲胎蛋白。同时测定AFU活性与血清甲胎蛋白水平可使原发性肝癌的阳性检出率从检测甲胎蛋白的70％左右提高到90～95％左右。另外，对肝细胞癌的疗效观察、监测复发有重要参考价值。肝癌术后AFU活性很快下降，其下降速度根据切除肝标本断面血管内有无癌栓而不同。有癌栓者术后两周内AFU不能降至正常，而无癌栓者术后一周内即可恢复正常水平。若以后AFU水平再度上升，则提示肝癌复发。因此，检测血清AFU活性，对肝癌高发人群的筛查、肝癌的早期诊断以及肝癌的疗效观察均有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗干扰性好的抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂及其使用方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂，所述试剂为液体双试剂，其中一种试剂R1的组分及含量为：

2-吗啉乙磺酸            0.10-100g/L，

磷酸盐：                0.10-100g/L，

稳定剂：                0.1-10g/L；

其中第二种试剂R2的组分及含量为：

2-吗啉乙磺酸MES：        0.1-100g/L，

EDTA-Na₂：               0.01-10g/L，

稳定剂：                 0.1-10g/L，

NaCl：                   0.05-25g/L，

2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷：0.05-20g/L，

醇：                           1-100g/L，

抗干扰剂：            1-10g/L。

具体地，所述稳定剂为二元醇、三元醇、多元醇中的至少一种；所述抗干扰剂为吐温-20、吐温-80、司盘-60、月桂醇聚氧乙烯醚、曲拉通-100、聚乙二醇中的至少一种；其中磷酸盐可以采用磷酸钠、磷酸二氢钠等，醇为甲醇、乙醇或多元醇等。

一种上述抗肝素干扰的α-L-岩藻糖苷酶酶法测定试剂的使用方法，包括下述步骤：

(1)样品准备：样品为空腹血清或血浆或体液，样品在低温条件下保存；

(2)采用全自动生化仪对步骤(1)的样品进行检测，具体参数如下：

方法：速率法     样品/试剂：1/9

主波长：405nm    反应温度：37℃

副波长：505nm    反应时间：10min

R1：169μl       R2：56μl    样品：25μl

步骤(1)中空腹血清或血浆采用肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；或采用EDTA抗凝，1.8mgEDTA可抗凝1.0ml血液；样品中α-L-岩藻糖苷酶在室温条件下可稳定8小时，在2℃～8℃可稳定7天，在-20℃保存可稳定2个月。