[发明专利]硫酸糖肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸糖肽的制备方法。

背景技术

硫酸糖肽(sulglycotide)属于一种经硫酸酯化修饰后的多糖肽。其基本制备过程，是先经一系列的蛋白水解作用由猪十二指肠粘蛋白或者胃粘膜提取得到糖肽，再以硫酸酯基团修饰碳链后得到的硫酸酯多糖蛋白即硫酸糖肽，分子量约900,000～1,000,000D。因其能具有显著抑制胃蛋白酶，而不影响胃液量和胃液酸度的功效，目前医疗上已将其用于对胃、十二指肠溃疡和胃炎的治疗，是用于胃及胃粘膜溃疡治疗的有力的胃保护剂。现有的研究报道显示，作为一种细胞保护因子，硫酸糖肽在治疗溃疡中表现出来的有益作用包括刺激碳酸氢盐的分泌，阻止胃粘膜层的腐蚀，护胃粘膜生长因子免受幽门螺旋杆菌的降解，以及促进内源前列腺素分泌水平的增加。此外，硫酸糖肽像其他胃保护剂一样可以提升粘膜生长因子的功效，同时影响调控细胞循环过程并与细胞增殖相关的细胞循环调节蛋白的表达，其还可以减轻阿司匹林等刺激性较强的药物对胃粘膜的伤害。

硫酸糖肽作为一种经硫酸酯化而得到的多糖肽物质，其制备研究的重点在于硫酸酯化的方法。但目前对于糖肽的硫酸酯化研究很少，而对多糖的硫酸酯化研究则较多。经硫酸酯化后的多糖为硫酸酯多糖或称多糖硫酸酯，其结构是硫酸根与糖羟基化学结合成键，其中与糖1位羟基成键的称为硫酸糖苷键。目前对硫酸酯多糖的研究，涉及了包括从动、植物中提取的各种硫酸多糖、肝素、天然中性多糖的硫酸衍生物及人工合成、半合成的各种硫酸多糖，如硫酸葡聚糖、硫酸戊聚糖、硫酸木聚糖、硫酸香菇多糖、岩藻依聚糖、卡拉胶硫酸软骨素等。目前已有文献报道的用于对多糖类化合物进行硫酸酯化反应，多以硫酸、发烟硫酸、硫磺酸或者三氧化硫、氯磺酸等作为提供硫酸根的磺化试剂，通过如氯磺酸-吡啶法、浓硫酸法、三氧化硫-吡啶法以及氯磺酸甲酰胺法等不同类型的方法进行。其中以氯磺酸-吡啶法操作简便易行，重现性好，收率高，故文献多采用此种方法。

糖蛋白属于一类复合糖或缀合蛋白质，在蛋白酶的作用下，糖蛋白可水解为糖肽，糖肽(plycopeptide)是糖和肽共价键合的物质。由猪十二指肠或胃粘膜提取得到的糖肽中，一般含有40～50％己糖胺，27～31％己糖，4～6％氨基酸衍生物，13～18％氨基酸，以及大量游离的硫、磷、脲酸等，沸点为100～200℃。目前对硫酸糖肽的制备，多是借鉴对多糖的硫酸酯化方法，以糖肽原料与相应的磺化试剂进行硫酸酯化反应。例如，借鉴用于硫酸酯多糖制备的氯磺酸-吡啶方法，通常是在-40～0℃的低温条件下进行酯化反应，得到糖肽的硫化物，再用碱成盐后得到最终产品。该产品酯化反应的关键在于硫化程度，一般情况下多采用4～8小时的长时间反应。其中，目前常用方法可如氯磺酸-吡啶法、氯磺酸-二甲基甲酰胺法、哌啶-N-磺酸-二甲亚砜法、三氧化硫-吡啶法等用于人工合成硫酸酯化多糖的方法，基本原理都是使糖肽结构中的多糖与相应的硫酸酯化试剂在一定的条件下反应，使得单糖残基上的某些羟基接上硫酸基团。其中以糖肽与氯磺酸在无水吡啶中进行酯化反应的效果为更好。反应结束后产品不溶于吡啶，可采用过滤手段得到产品，而其中的杂质的去除则通过透析或者采用离子交换树脂处理其水溶液，最后用氢氧化钠成盐，并可通过以丙酮、甲醇等适当溶剂沉淀的后续处理，得到最终产品并提高其硫化程度。

已有研究报道，硫酸糖肽的药效作用主要缘于其中的亚硫基，而硫酸糖肽中的S就是以亚硫基的形式存在的，因此硫酸糖肽中硫的含量即等同于亚硫酰基的含量，含量越高，即硫酸糖肽的硫酸酯化程度越高，产品的药效越强(Mirelli E et.“preliminary clinical research on a new anti-ulcer drug”，《Clin Ter》1979 May 31；89(4)：365-71)。

但以上述的氯磺酸-吡啶法为例，目前对糖肽与氯磺酸在无水吡啶中进行酯化反应的操作，都采用的是将糖肽原料与氯磺酸及溶剂吡啶一并直接混合的方式进行反应。由于氯磺酸与吡啶的反应会产生大量的热，为避免因局部温度过高糖肽而使原料受到破坏，通常需将反应温度控制在十分苛刻的-15℃～-40℃低温条件下进行。但另一方面，作为反应溶剂的吡啶在此低温条件下也为固态，难以起到使反应原料充分分散和接触的作用，因而收进影响了硫酸糖肽产品的收率及其硫含量的提高，例如，目前方法制备得到的硫酸糖肽如果不经过后续繁杂的处理，其硫含量一般只有3～4％左右。

发明内容