[发明专利]哺乳动物细胞核受体转录活性的体外检测方法

权利要求书

1.一种哺乳动物细胞核受体转录活性的体外检测方法，其包含下列步骤：

a)配体或/和待测配体类物质和目标核受体进行温育，获得反应复合物；

b)反应复合物加入包含目标核受体特异识别DNA序列和报告基因的表达载体的体外蛋白翻译系统或体外基因转录系统，进行报告基因RNA表达或报告基因蛋白表达；

c)检测报告基因mRNA或报告基因蛋白；

其中步骤a和b也可合并，在同一反应体系进行。

2.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在于所述目标核受体可为通过基因工程表达的目标核受体蛋白或含有目标核受体的哺乳动物组织或细胞匀浆液。

3.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在于所述目标核受体可为激素受体、维生素D受体、全反式视黄醛受体、视黄素X受体、过氧化物倍增激活受体、孤儿核受体、肝X受体、类法呢X受体、组成型雄烷受体、人固醇类异生物受体或啮齿目动物中同源的孕烷X受体中之一。

4.如权利要求3所述的体外检测方法，其特征在于所述激素受体可为雄激素受体、雌激素受体、孕激素受体、糖皮质激素受体、盐皮质激素受体、或甲状腺素受体中之一。

5.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在于所述配体可分为核受体激动剂和核受体拮抗剂。

6.如权利要求5所述的体外检测方法，其特征在于所述核受体激动剂可为二氢睾酮，雌二醇，孕酮，甲状腺素，维生素D，维生素A，地塞米松，或化合物T0901317。

7.如权利要求5所述的体外检测方法，其特征在于所述核受体拮抗剂可为氟硝丁酰胺，他莫昔芬，米非司酮，奥娜司酮，化合物A2348441，或化合物AL082D06。

8.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在于所述表达载体可为原核表达质粒，真核表达质粒，病毒表达载体，昆虫表达系统，酵母表达系统，真菌表达系统，或噬菌体表达系统，或是一段线性的核苷酸序列。

9.如权利要求8所述的体外检测方法，其特征在于所述表达载体中，所述目标核受体特异识别DNA序列为报告基因的翻译起始点前面。

10.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在于所述报告基因可为绿色荧光蛋白基因、β-半乳糖苷酶基因、或荧光素酶基因。

11.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在所述检测报告基因mRNA可采用RT-PCR、FQ-PCR、分光光度法、或Norther Blot方法。

12.如权利要求1所述的体外检测方法，其特征在所述检测报告基因蛋白可选用可见光/荧光分光光度计法、酶法、放免法、ELISA、免疫沉淀、或Western Blot方法。