[发明专利]一种ATDC基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种ATDC基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

胰腺癌已成为我国人口死亡的十大恶性肿瘤之一。年轻的胰腺癌病人也较10年前有明显增加的趋势，而且恶性度更高，预后更差。就胰腺癌的发生部位而言，仍以胰头部位最多见，约占70％左右，胰体次之，胰尾部更次之，有的头体尾部均有，属于弥漫性病变或多中心性病变。目前，胰腺癌的发病原因尚不清楚，已发现一些环境因素与胰腺癌的发生有关。其中已定的首要危险因素为吸烟。吸烟者发生胰腺癌相对危险度是非吸烟者的1.5倍，而且随着吸烟数量增加而增加。其他高危险因素还有糖尿病、胆石病、饮酒(包括啤酒)以及慢性胰腺炎等。进食高脂肪、高蛋白饮食和精制的面粉食品，胃切除术后20年者，也是发生胰腺癌的危险因素。胰腺癌致死性特高，可能由于它发病诡秘隐匿，确诊时多已进入晚期之故。

ATDC基因在胰腺癌中过度表达，约正常正常胰腺的20倍，ATDC基因的过表达促进胰腺的癌变及转移，它在膀胱癌、肺癌的病理演变中也扮演了重要角色。美国密歇根大学员最新研究发现，在胰腺癌细胞中，一种名为ATDC的基因表达水平是正常胰腺细胞中表达水平的20倍，而且这种基因能增强胰腺癌细胞对现有疗法的耐受性。研究人员在3月刊的《癌细胞》杂志上介绍说，他们将ATDC基因充分表达或被抑制的胰腺肿瘤细胞分别注入两组实验鼠体内。60天后，ATDC基因充分表达组的实验鼠体内胰腺肿瘤增大，良性向恶化发展，并出现扩散；而对照组实验鼠只有很小的肿瘤生长迹象。研究人员认为，这表明ATDC基因促进了胰腺肿瘤细胞的生长和恶性病变。研究认为，这种基因在膀胱癌、肺癌的发展过程中可能也扮演了某种角色。负责这项研究的迪亚纳·西梅奥内说，ATDC基因不仅导致胰腺癌细胞生长更快、更富有攻击性，而且会增加其对化疗和放疗的耐受性。如果开发出以这种基因为靶向的药物或疗法，或许能增强现有化疗、放疗对胰腺癌的治疗效果。胰腺癌的早期诊断非常困难，目前，临床被发现的胰腺癌大多是晚期病人，大都只有三个月的生存期，如何做到早期诊断是临床和患者十分迫切的。本发明采用核酸原位杂交技术检测ATDC基因，对胰蛸癌的基因食品的早期诊断有非常重要的临床意义。ATDC基因序列号：NM-012101，3037bp，11q22-q23”cds：125…1891bp。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到基因水平的早期预测诊断。

本发明的原位杂交技术(in situ hybri dization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种ATDC基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种ATDC基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种ATDC基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种ATDC基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测胰腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。

所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种ATDC基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：