[发明专利]一种PDE7B基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种PDE7B基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

慢性淋巴细胞白血病(CLL)是欧美白种人较为常见的白血病，亚洲人也多发，一旦发现疗效不是很好。2008年全美约有15100例慢性淋巴细胞新发病例，其中有4400人因此死亡。美国加州大学圣地安哥分校医学院药理学教授保罗.A赛尔等研究发现，在白血病患者体内一组被称为环核苷酸磷酸二脂酶的酶中，一种PDE7B磷酸二脂酶的含量比正常人高10倍。PDE7B可控制环磷酸腺苷(cAMP)的水平，该化学物质可促进编程性细胞死亡，在CLL患者体内该过程往往存在缺陷。虽然大多数的癌症都会失去对细胞生长的控制，CLL的特点在于本来应该死亡的白细胞却大量存在。而高水平的PDE7B意味着cAMP含量的减少和细胞正常死亡率的降低。研究人员对85例尚未得到治疗的CLL患者和30位健康的成人体内的PDE7B水平进行监测对比，他们按照体内PDE7B含量的高低将受试者分为两类，进一步确定PDE7B对白血病诊断的意义。赛尔研究小组发现，具有高含量PDE7B的个体确实也存在更严重的疾病，相对来说，PDE7B是目前较为准确的白血病监测指标，在某些情况下，PDE7B水平也可以作为一种新的白血病标志物。研究人员称，如果含量比较高，PDE7B可以单独作为诊断CLL的标志物。在PDE7B含量不高时，我们采用检测PDE7B mRNA的方法可以更早期检测到CLL已发生、发展，对白血病的早期基因诊断有重要的临床意义。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种PDE7B基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种PDE7B基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种PDE7B基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种PDE7B基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测慢性淋巴细胞白血疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。PDE7B基因序列号：NM-018945，mRNA 5387bp，位于染色体6q23-q24″，CDS：304...1656bp。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。

所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种PDE7B基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种PDE7B基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤：

a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；

b、检测a步骤得到的杂交复合体。

所述的a步骤中形成杂交复合体的条件为：核酸杂交的温度为42℃；核酸杂交的时间为16-24小时，所述的底物选用血液细胞标本或组织细胞标本。

本发明的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括：