[发明专利]NPTX2基因在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种新的抑癌基因——NPTX2基因及其编码的蛋白质在制备抗肿瘤药物和肿瘤诊断试剂中的应用。

背景技术

恶性肿瘤，一类严重危害人类健康的疾病，其生成涉及多种基因和基因以外的变化，最常发生变化的两类基因为癌基因与抑癌基因。2008年，科学家们通过研究发现众多新的与癌症发生发展相关的基因。美国弗吉尼亚联邦大学科学家发现了一种称为SARI的新抑癌基因，它能够参与并抑制一种关键蛋白质，这种蛋白质在90％的人类癌症中都过度表达(Su ZZ(2008).Proc Natl Acad Sci USA.105：20906-20911)。Zender等人则在Cell杂志上报道了13种新抑癌基因，其中的大多数人们之前都没有意识到它们和癌症有关(Zender L(2008).Cell.135：852-864)。不断扩充的癌基因与抑癌基因新名单无疑给人们带来希望的曙光。

神经元正五聚蛋白(Neuronal pentraxin，NP，NPTX)有两个亚型，NPI(NPTX1)和NP II(NPTX2)。NPTX2分布较广，在脑、肝脏、胰腺、心脏、骨骼肌和睾丸中均有表达。NPTX2基因位于人染色体7q21.3-q22.1(GENBANK No.：NM_002523)，编码431个氨基酸，NPTX2为一47.05kDa的蛋白，有一个信号肽序列和三个N糖基化位点，是一种可分泌蛋白(Hsu YC(1995).Genomics.28：220-227；Schlimgen AK(1995).Neuton.14：519-526)。

关于NPTX2的功能研究在神经系统及其相关疾病中研究相对较多。NPTX2基因在胰腺癌中的研究主要集中在表观遗传学方面，发现该基因启动子CpG岛甲基化参与其表达调控(Matsubayashi H(2006).CancerRes.66：1208-1217；Sato N(2008).Mod Pathol.21：238-244；Park JK(2007).Pancreas.35：e9-15；Parsi ML(2008).Clin Gastroenterol Hepatol.6：1270-1278)。但尚无关于该基因为抑癌基因的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的抑癌基因——NPTX2基因及其编码的蛋白质在制备抗肿瘤药物和肿瘤诊断试剂中的应用。

本发明利用分子克隆及体外实验等方法，发现NPTX2基因在制备抗肿瘤药物和肿瘤诊断试剂中的应用方面的新功能，并对其进行了如下研究：

1.利用实时定量PCR、细胞爬片等方法观察到NPTX2基因在胰腺癌中处于低表达状态，且其低表达至少部分原因是由于该基因启动子的高甲基化参与了表达调控。

2.通过构建真核表达载体和流式分析瞬时转染后人胰腺癌细胞株的细胞凋亡情况，发现转染NPTX2基因全长cDNA后细胞凋亡增加。

3.利用上述构建好的真核表达载体和脂质体转染的方法将含有该基因的真核表达质粒转入人胰腺癌PANC-1细胞系中，通过G418筛选获得稳定表达株。

4.进行了一系列体外实验发现NPTX2基因过表达可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭力。

以上实验结果判定，NPTX2基因是一种潜在的抑癌基因，可为肿瘤的分子治疗提供新的靶点，亦可与其他药物、分子治疗联合应用，用于预防或治疗胰腺癌，或用于制备肿瘤诊断试剂。

本发明提供了NPTX2基因及其编码的蛋白质在制备抗肿瘤药物和肿瘤诊断试剂中的应用。

上述的肿瘤是胰腺癌。

附图说明

图1是实时定量PCR方法检测NPTX2基因在胰腺癌组织和癌旁正常胰腺组织中的相对表达量。

图2AsPC-1、BxPC-3、CFPAC、PANC-1和PaTu89885株人胰腺癌细胞细胞爬片结果，5株人胰腺癌细胞株均有NPTX2蛋白表达，在5Aza-dC处理后5株人胰腺癌细胞株中NPTX2蛋白的表达水平均有不同程度的增高。

图3是NPTX2基因全长cDNA质粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)转染人胰腺癌BxPC-3细胞株(以pcDNA3.1(+)作为对照)，转染48h后以Annexin V和PI双标记法检测细胞凋亡，重复后分析两组的凋亡率。

图4是NPTX2基因全长cDNA质粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)转染人胰腺癌BxPC-3细胞株(以pcDNA3.1(+)作为对照)，转染48h后以Annexin V和PI双标记法检测细胞凋亡的代表结果。