[发明专利]蝴蝶兰花发育B族基因-PhAP3编码序列及其应用

权利要求书

1.一种蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白，其特征在于包含具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其衍生物。

2.如权利要求1的蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白，其特征在于：选自下组：(a)具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽；和(b)将SEQ ID NO：2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，具有MADS盒B族AP3蛋白功能的由(a)衍生的多肽。

3.如权利要求2所述的蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白，其特征在于：该蛋白具有SEQ ID NO：2氨基酸序列。

4.编码权利要求1、2或3的蛋白的多核苷酸。

5.如权利要求4的多核苷酸，其特征在于：该多核苷酸与选自下组的一种核苷酸序列至少70％相同性：(a)编码蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

6.如权利要求5的多核苷酸，其特征在于：该多核苷酸编码蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白。

7.如权利要求6所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码SEQ ID NO：2的多肽。

8.如权利要求7的多核苷酸，其特征在于，选自下组：(a)具有SEQ ID NO：1的序列；和，(b)具有SEQ ID NO：1中1～684位的序列。

9.一种载体，其特征在于，包含权利要求4的多核苷酸。

10.如权利要求9的载体，其特征在于，包含如权利要求8的多核苷酸。

11.一种基因工程宿主细胞，其特征在于，含有权利要求9的载体或其基因组中整合有权利要求4的多核苷酸。

12.如权利要求11的基因工程宿主细胞，其特征在于，含有权利要求10的载体或其基因组中整合有权利要求8的多核苷酸。

13.制备蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白的方法，该方法包含步骤：

(i)在合适的条件下培养上述被转化或转导的宿主细胞；

(ii)从培养物中回收蝴蝶兰MADS盒B族AP3蛋白。

14.一种用于检测样品中蝴蝶兰PhAP3基因拷贝数的方法，包括步骤：

(a)抽提样品基因组DNA，用限制性内切酶酶切获得酶切片段；

(b)利用前述多核苷酸序列SEQ ID NO：1的特异区段作为探针，对(a)中的酶切片段进行Southern杂交，检测目的片段与探针的结合。

15.如权利要求14的检测样品中蝴蝶兰PhAP3基因拷贝数的方法，其特征在于，所述的特异区段为SEQ ID NO：1的3’UTR区段。

16.一种检测蝴蝶兰B族PhAP3基因mRNA表达模式的方法，其步骤如下：

(1)提取蝴蝶兰花器官的总RNA；(2)利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，根据SEQ ID NO：3设计引物，进行PCR。

17.一种检测PhAP3基因在蝴蝶兰植株组织表达分布状况的方法，其步骤如下：

(1)取小块组织材料，经多聚甲醛处理和梯度脱水，包埋于石蜡组织中；

(2)实验检测时取复水和蛋白酶K处理过的切片与事先制备的DNA探针分子在杂交液中混合杂交，显色后观察拍照；而杂交使用的DNA探针分子为包含于PhAP3基因的某特异区段3’UTR的DNA序列。