[发明专利]一种异黄酮苷类化合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学领域，具体而言，涉及一种异黄酮苷类化合物及其制备方法。

背景技术

自从发现并使用青霉素后，人类对抗微生物感染获得了重大突破，但随着抗生素的不断使用，细菌、真菌等微生物的抗药性也不断提高，这对临床抗感染治疗构成持续的挑战。

因此，寻找新的抗生素或具有抑菌/杀菌作用的化合物成为一个重要的研究课题，也具有同样的紧迫性，尤其是在抗真菌药物方面更是如此。

发明内容

本发明涉及的化合物，其来自于东方拟无枝酸菌ATCC 43491的发酵液，为发酵液中一种含量较低的组分，通过分离纯化，经质谱(MS)、核磁共振氢谱(¹H NMR)、核磁共振碳谱(¹³C NMR)检测，进行结构分析，确定该组分为一种新的化合物。

因此，本发明的首要目的在于，提供一种新的化合物。

本发明提供的化合物，如结构式(I)所示：

本发明的另一个目的在于，提供如结构式(I)所示的化合物的制备方法。

本发明提供的化合物通过发酵培养东方拟无枝酸菌获得。

根据本发明，使用的东方拟无枝酸菌为东方拟无枝酸菌ATCC 43491。

根据本发明，该化合物的制备方法还包括以下步骤：

A)东方拟无枝酸菌发酵液离心，收集离心上清；

B)对步骤A获得的离心上清，使用HPD100树脂进行初纯，收集洗脱液；

C)对步骤B中获得的洗脱液使用中压液相色谱精纯，收集洗脱液。

根据本发明，HPD100树脂初纯包括以下步骤：将离心上清液上样到HPD100树脂柱上，用乙醇-水溶液梯度洗脱，收集乙醇体积百分比在25％到35％区段的洗脱液。

根据本发明，中压液相色谱精纯包括以下步骤：将步骤B中获得的洗脱液上样到反相C-18柱；使用体积比为35∶65的甲醇-水溶液1洗涤；使用体积比为44∶56的甲醇-水溶液2洗脱，收集洗脱液，获得本发明提供的化合物溶液，其中，在上样至C-18柱步骤前，对步骤B中获得的洗脱液进行浓缩，甲醇-水溶液2的pH为3.8。

本发明提供了结构式(I)所示的新的化合物，该化合物对白色念珠菌具有很好的抑制作用，可用于开发抗菌药物。

附图说明

图1是东方拟无枝酸菌发酵离心上清的HPLC检测图谱，其中，峰1为化合物LYV09lx01的峰。

图2是中压液相色谱精纯后获得的洗脱后溶液的HPLC检测图谱。

图3是化合物LYV09lx01的质谱检测结果。

图4是化合物LYV09lx01的核磁共振氢谱的检测结果。

图5是化合物LYV09lx01的核磁共振碳谱的检测结果。

图6是化合物LYV09lx01的结构式。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

在本发明的下述实施例中，使用的培养基组成如下：

斜面培养基：高氏1号琼脂培养基。

种子培养基：可溶性淀粉40g/L，去脂黄豆粉20g/L，甘油20g/L，葡萄糖15g/L，KNO₃6g/L，KH₂PO₄0.2g/L，MgCl₂·6H₂O 0.4g/L。

发酵培养基：乳糖20g/L，黄豆粉15g/L，氯化钠3g/L，硫酸镁1g/L，磷酸氢二钾1g/L。

在本发明的下述实施例中，HPD100树脂初纯条件如下：

取发酵液离心上清液上HPD100树脂柱，以乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分比在25％-35％区段的洗脱液，浓缩得LYV09lx01粗品溶液。

中压液相色谱纯化条件如下：

色谱柱为反相C-18柱。样品上柱后先用甲醇∶水＝35∶65(体积比)溶液洗涤除杂，然后用甲醇∶水(体积比)＝44∶56的溶液(磷酸调pH至3.8)洗脱，收集洗脱液，以HPLC检测洗脱液中产物。

HPLC条件如下：

流动相配制：用0.2％的三乙胺溶液，磷酸调pH至3.2作为缓冲液。缓冲液与乙睛和四氢呋喃按92∶7∶1的比例混合，摇匀，作为A液；缓冲溶液与乙睛和四氢呋喃按70∶29∶1的比例混合，摇匀，作为B液。超声波脱气20min，备用。

色谱柱：Diamonsil^TM C18，0DS，ID 4.6*200mm

柱温：40℃