[发明专利]一种CHO细胞中重组糖蛋白高水平表达的载体系统pGN

权利要求书

1.一种可用于在动物细胞内表达外源蛋白的表达载体，其特征在于，所述的载体含有表达外源蛋白的表达盒，所述的表达盒从5’至3’依次具有以下元件：

(a)第一启动子，所述的第一启动子选自：CMV启动子；

(b)多克隆位点以及任选的位于多克隆位点之中、之前或之后的外源蛋白的编码序列；

(c)第一polyA序列，所述的第一polyA序列选自：牛生长因子polyA(bovine growth factor hormone polyA)；

(d)第二启动子，所述的第二启动子选自：β-肌动蛋白启动子或SV40早期启动子；

(e)选择标记基因，所述的选择标记基因选自：DHFR基因；和

(f)第二polyA信号序列，所述的第二polyA信号序列选自：SV40 polyA信号序列。

2.如权利要求1所述的表达载体，所述的外源蛋白是β干扰素。

3.如权利要求1所述的表达载体，所述的β干扰素来源于人。

4.如权利要求1所述的表达载体，所述的β干扰素具有天然序列、变异序列或重组序列；

更佳地，所述的β干扰素具有SEQ ID NO：1所述的核苷酸序列。

5.如权利要求1所述的表达载体，所述的标记基因是二氢叶酸还原酶基因。

6.如权利要求1所述的表达载体，所述的标记基因具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

7.一种由权利要求1-6中任一所述的表达载体所转化的宿主细胞。

8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞选自：中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、小鼠细胞(NIH/3T3)、猴细胞(COS-1细胞)或人细胞(Hela细胞)。

9.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞中具有3-20个所述的表达载体、3-20个所述的表达盒、或、3-20个拷贝的所述外源基因的编码序列；和/或

所述的宿主细胞表达外源蛋白的速度≥1.5pg/细胞/天，较佳地≥2.0pg/细胞/天，更佳地≥3.0pg/细胞/天，更佳地≥4.0pg/细胞/天，≥5.0pg/细胞/天。

10.一种制备外源蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(a)培养权利要求7所述的宿主细胞，从而表达所述的外源蛋白；

(b)分离出表达的所述的外源蛋白。