[发明专利]一种鉴定目标核酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及鉴定目标核酸的方法及试剂盒。

背景技术

ELISA方法是抗体应用技术中最常见的方法之一(BS Dunbar & SM Skinner(1985)“Preparation of monoclonal antibodies”.In：“Methods in Enzymology Vol.182，Guide to Protein Purification”.Ed.MP Deutscher，pp.670-679，AcademicPress；D Catty & C Raykundalia(1989)“ELISA and related enzymeimmunoassays”.In：“Antibodies：A practical approach.vol.2”Ed.D Catty，pp.97-154.IRL Press)。这些方法中，Sandwich ELISA是ELISA方法的一种变形，即第一种抗体首先包被于固定相上，清洗后，抗原(通常是蛋白质)结合于第一种抗体，再清洗后，第二种抗体结合于抗原上，其操作流程通常如图1所示。第二种抗体可以偶联有酶进行酶活性检测(图1虚线途径)，或者用抗第二种抗体的第三抗体与酶的偶联物进行检测酶活性(图1实线途径)。

现有技术中，用ELISA的方法研究蛋白质的技术已非常成熟。过去数十年来，ELISA的方法无实质性变化(GC Howard & DR Bethell(eds.)(2002)“Basic methods in antibody production and characterization.”CRC Press；CF BarbasIII，DR Burton，JK Scott & GJ Silverman(eds.)(2001)“Phage Display：ALaboratory Manual.”Cold Spring Harbor Laboratory Press)。

一种抗体与其蛋白质抗原相对应的抗原决定簇(epitope)相结合。本领域人员均了解，一种抗体只能与一个抗原决定簇位点相结合。一般情况下，常规抗原-抗体的结合检测(如Sandwich ELISA)很难将抗原先与抗体结合后再进行捕获测定而获得好的结果，特别是在应用多克隆抗体的情况下。因此，通常本领域人员都是将抗原先用一种抗体捕获后，洗涤后再用另一种抗体进行检测，两个抗体结合步骤分开进行。

作为抗原，DNA-RNA核酸双链杂交体是一种与蛋白质抗原存在显著差别的物质。现有技术中，均采用了类似ELISA方法捕获和检测DNA-RNA双链杂交体，这些方法的步骤基本上与世界专利PCT号WO93/10263所公布说明的杂交捕获法相一致，没有任何已发表的关于对其进行简化或优化操作的文献。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴定目标核酸的方法。

本发明的另一目的在于提供鉴定目标核酸的试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定目标核酸的方法，所述方法依次包括：

(a)将待测的核酸样本解链处理，得到单链核酸样本；

(b)将特异性识别目标核酸的探针与步骤(a)获得的单链核酸样本杂交，其中，当目标核酸是DNA时，所述探针是RNA；当目标核酸是RNA时，所述探针是DNA；得到双链杂交体样本；

(c)将步骤(b)获得的双链杂交体捕获到固相载体上，测定被捕获的杂交体；从而得知目标核酸的存在与否或存在量。

在一个优选例中，将双链杂交体捕获到固相载体上与测定被捕获的杂交体同步进行，也即所述的双链杂交体捕获到固相载体上与测定被捕获的杂交体两个步骤之间不经过洗涤步骤。

在另一优选例中，所述的目标核酸是DNA。

在另一优选例中，所述的目标核酸长度是200-50000bp，优选500-30000bp；所述的探针长度是200-50000bp，优选500-30000bp。

在另一优选例中，步骤(c)中，将双链杂交体捕获到固相载体上包括：将双链杂交体样本、检测抗体加样(优选同时加样)到包被有包被抗体的固相载体上，在固相载体上形成包被抗体-双链杂交体-检测抗体三元复合物；其中，所述的检测抗体是抗所述双链杂交体的抗体，其携带有可检测信号；所述的包被抗体是抗所述双链杂交体的抗体。