[发明专利]基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法

权利要求书

1、一种基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将表面带有羧基或氨基的水溶性量子点与二抗连接，

(1)如果是表面带有羧基的水溶性量子点，则首先将量子点分散在硼酸盐缓冲溶液中，然后加入硫化二亚胺和二抗，混合，25℃下反应3小时，离心，洗涤，得到量子点标记的二抗复合物；

其中，量子点∶硫化二亚胺∶二抗的摩尔比为60∶15∶1；

(2)如果是表面带有氨基的水溶性量子点，则首先将量子点分散在含有体积分数为1.25％的戊二醛的磷酸缓冲溶液中，超声使之完全分散，25℃下摇床活化反应3小时，加入二抗，在4℃下反应24小时，离心，洗涤，得到量子点标记的二抗复合物；

其中，量子点∶戊二醛∶二抗的摩尔比为60∶15∶1；

步骤二，将切片标本先放入二甲苯中脱腊2次，然后置入无水乙醇中梯度水化，水洗，过氧化氢灭活内源性过氧化氢酶，微波抗原修复，水洗后用正常山羊非免疫血清封闭，滴加一抗，4℃反应过夜，磷酸缓冲溶液洗后加入量子点标记的二抗复合物，避光条件下37℃反应30～60分钟，磷酸缓冲溶液漂洗，甘油封片；磷酸缓冲溶液代替一抗作为阴性对照，在荧光显微镜下观察样本。

2、根据权利要求1所述的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征是，步骤一中，所述硼酸盐缓冲溶液的pH为9.18。

3、根据权利要求1所述的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征是，步骤一中，所述磷酸缓冲溶液的pH为7.4。

4、根据权利要求1所述的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征是，步骤一中，所述表面带有羧基或氨基的水溶性量子点为InP，InAs，InCaAs，InAs/Cdse，InAs/ZnSe，InAs/InP，ZnS，CdS，HgS，ZnSe，CdSe，HgSe，PbSe，HgTe，CaAs，CdS/ZnS，CdS/Pbs，ZnS/CdS，ZnS/CdS，CdSe/CdS，CdSe/Cuse，CdSe/HgTe，CdSe/ZnSe，CdSe/HgSe，CdTe，MgS，Mgse，MgTe，CaS，Case或CaTe中的一种或几种的组合。

5、根据权利要求1所述的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征是，步骤一中，所述表面带有羧基或氨基的水溶性量子点，发射波长为520nm～680nm。

6、根据权利要求1所述的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征是，步骤二中，所述一抗为磷酸缓冲溶液1∶500稀释的冻干粉一抗。

7、根据权利要求1所述的基于量子点基础上的免疫组化分析检测方法，其特征是，步骤二中，所述量子点标记的二抗复合物具体为，将步骤一得到的量子点标记的二抗复合物稀释300倍。