[发明专利]取代苯甲酰脲类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体涉及一类作为亲环素A的小分子非肽类抑制剂的取代苯甲酰脲类化合物及其制备方法和药理用途，该类化合物可作为免疫抑制剂和抗HIV-1药物。

背景技术

亲环素(Cyclophilin，CyP)的发现与命名起源于它对环孢素(Cyclosporin A，CsA)的高度亲合性，CsA是临床上广泛使用的一种免疫抑制药物(Handschumacher RE等.Science，1984，226：544-547)。CyP是一个保守的蛋白质家族(Gothel SF，Marahiel MA.Cell Mo.Life Sci，1999，55：423-436)，从低等原核生物到哺乳动物都有这类蛋白。该组蛋白的共同特征是具有肽脯氨酰顺反异构酶(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase，PPIase)活性(Takahashi N，Hayano T，Suzuki M.Nature，1989，337：473-475)。依据相对分子量以及亚细胞定位等特征，目前已知人CyP家族有CypA、CypB、CypC和CypD等16种成员，人亲环素A(hCypA)是最重要的，也是研究最广泛的成员(Braaren D，Luban J.EMBO J，2001，20：1300-1309)，它由165个氨基酸组成，相对分子量18,000，约占细胞蛋白总量的0.1％～0.4％，主要位于胞质内。除了作为CsA的体内结合蛋白，在体内外，hCypA都能结合蛋白质并催化加速它们的折叠、装配和转运，起分子伴侣的作用(Freskgard PO等.Science，1992，258：466)。

CypA包含八股反平行β片层，这些β片层组成一个桶状结构，在桶的上下口各有一段α螺旋将桶的两端封闭，CypA的配体结合口袋则位于该桶状结构的侧面(Kallen J等.Nature，1991，353：276-279)，主要由两个大的亚口袋组成：亚口袋A和亚口袋B。亚口袋A主要由Thr73、Gly74、Asn102、Ala103、Thr107、Gly109、Ser110和Gln111等残基组成，它们大部分为亲水性残基；亚口袋B为一深的疏水性凹槽，主要由Phe60、Met61、Phe113和Leu122等残基组成。

CypA与多种疾病密切相关，1993年，Luban等人发现CypA和CypB可以与I型爱滋病毒(HIV-1)的Gag蛋白特异性地结合，而CsA可以有效地抑制Gag-CypA之间的相互作用(Luban J等.Cell，1993，73：1067-1078)；1994年，Franke(Franke EK，Yuan HE.Nature，1994，372：359-362)和Thali等人(Thali M等.Nature，1994，372：363-365)分别在Nature上发表论文报道发现CypA特异性地掺入到HIV-1病毒颗粒中，阻断CypA的掺入，抑制HIV-1的复制，这说明CypA与Gag蛋白的结合是功能相关的(Luban J.Cell，1996，87：1157-1159)。HIV-1的Gag蛋白为一个多蛋白，它在病毒组装、成熟和出芽过程中起着决定性作用(Gamble TR等.Cell，1996，87：1285-1294)。CypA与Gag蛋白中的衣壳蛋白(Capsid，CA；231 residues)区域相结合，通过这一作用，CypA被特异性地包裹进HIV-1病毒颗粒中。但CypA的缺失并不影响病毒的组装、出芽和成熟，它在HIV-1生命周期的早期(病毒逆转录开始之前)是必需的。因此，CypA可能在病毒进入宿主细胞后的脱壳(Uncoating)过程中发挥作用，帮助病毒核心发生解装配(Viral CA core disassembly)。

中国科学院上海药物研究所蒋华良等人(Luo C等.Biochem Biophys Res Commun，2004，321：557-565)通过生物信息学的手段发现：虽然SARS-CoV并不编码CA蛋白，但SARS-CoV N蛋白的Val235～Pro369片断与HIV-1 CA蛋白的N端结构域(残基1～151)具有较高的序列相似性(36.7％)，因此推测SARS-CoV N蛋白可能也与CypA发生相互作用。之后，蛋白-蛋白结合活性实验证实了这一假设：SARS-CoV N蛋白和CypA具有很高的亲和性，KD值约为6～160nM；接下来的定点突变实验初步地确定了SARS-CoV N蛋白的Trp302～Pro310片断为与CypA结合的区域。以上结果说明CypA很有可能参与SARS-CoV的生命活动过程。