[发明专利]一种纤维堆囊菌生产埃坡霉素B的发酵方法及发酵培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种纤维堆囊菌生产埃坡霉素B的发酵方法及发酵培养基。

背景技术

埃坡霉素B作为粘细菌纤维堆囊菌的次级代谢产物，是一种微管超稳定的新型抗肿瘤活性物质。埃坡霉素B的作用机制与紫杉醇相同，但其在抗肿瘤谱、抗肿瘤活性、安全性、水溶性及合成方法等方面均优于紫杉醇，是一类前景广阔的新型抗肿瘤药物。

为了进行埃坡霉素的大规模生产，生物发酵是理想的途径。埃坡霉素B一般由粘细菌纤维堆囊菌Sorangium cellulosum 90发酵生产。专利WO93/10121中报道，在含碳源、氮源和无机盐的介质中培养纤维堆囊菌的菌株，并在培养过程中加入吸附性树脂，可生产得到低产量的埃坡霉素B。文献《纤维堆囊菌的代谢产物及其生物学活性分析》(李越中，微生物学报，2001，41(6))，文献《粘细菌纤维堆囊菌降解纤维素多酶复合体的确证和性质分析》(侯配斌，博士毕业论文，山东大学)，以及文献《Mutation and ahigh-throughput screening method for improving the production of Epothilonesof Sorangium》(Guo-li Gong，J.Ind.Microbiol.Biotechnol.2007，34：615-623)均报道，使用M26培养基发酵粘细菌纤维堆囊菌，也可获得低产量的埃坡霉素B。

尽管使用M26培养基发酵粘细菌纤维堆囊菌可以生产埃坡霉素B，但产量较低；若采用诱变筛选，又由于粘细菌纤维堆囊菌难以培养，诱变筛选难度又很大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了一种纤维堆囊菌发酵培养基，其用于发酵培养纤维堆囊菌制备埃坡霉素B时，菌株性能稳定，生长快速，产品埃坡霉素B的产量明显提高。本发明还提供了一种纤维堆囊菌生产埃坡霉素B的发酵方法。

本发明提供了一种纤维堆囊菌发酵培养基，其包括碳源、氮源、无机盐、大孔吸附树脂和水，还包括氨基酸。

其中，所述的氨基酸较佳的选自赖氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸。

其中，所述的氨基酸的含量较佳的为0.1-500mg/L，更佳的为1-10mg/L。

其中，所述的纤维堆囊菌发酵培养基的pH值较佳的为3-9，更佳的为5-8。

其中，所述的纤维堆囊菌较佳的为Sorangium cellulosum 90。

其中，所述的碳源为本领域常规使用的碳源，较佳的为0.2-2wt％的土豆淀粉或玉米淀粉或麦芽糊精或土豆糊精，以及0.1-1wt％的葡萄糖。

其中，所述的氮源为本领域常规使用的氮源，较佳的为0.05-0.5wt％的大豆蛋白胨或胰胨，以及0.1-1wt％的酵母膏。

其中，所述的无机盐为本领域常规使用的无机盐，较佳的为0.05-0.5wt％的MgSO₄·7H₂O，0.05-0.5wt％的CaCl₂·2H₂O，以及0.5-5ml/L的微量元素液。所述的微量元素液为本领域常规使用的微量元素液，较佳的参考Reichenbach H.，Dworkin M.等人的《The Myxobacteria.The Prokaryote》(2nded.1992.3418-3487)中相关内容配制，标准微量元素液(1L体系)：MnCl₂·4H₂O 100mg，CoCl₂ 20mg，CuSO₄ 10mg，Na₂MoO₄·2H₂O 10mg，ZnCl₂ 20mg，LiCl 5mg，SnCl₂·2H₂O 5mg，H₃BO₃ 10mg，KBr 20mg，KI 20mg，EDTANa-Fe³⁺8g。

其中，所述的大孔吸附树脂较佳的为非极性大孔吸附树脂，鉴于其用于发酵，为使之不易破碎，考虑其机械强度，更佳的选择使用XAD-16大孔吸附树脂。

其中，所述的大孔吸附树脂的用量较佳的为体积百分比2％。

其中，所述的水较佳的为去离子水；所述水的用量较佳的为补足质量百分比100％。