[发明专利]一种鉴别斑尾刺虾虎鱼卵子质量的方法

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖技术，涉及到一种鉴别斑尾刺虾虎鱼卵子质量的方法。

背景技术

在养殖生产中，水生生物卵子质量的好坏直接影响到受精力的高低，进而影响到出苗率和成活率，卵子质量的好坏和生产效益密切相关。因此，对水生生物卵子质量进行正确评价具有重要的理论意义与应用价值。现阶段，对水生生物卵子质量评价报道较为少见，一般采用组织切片染色后进行显微观察，这种方法流程较为烦琐，且只能观察到不同发育时期的卵的内部结构和特征，不能从根本上判别某一发育时期的质量好坏，也不能直接指导生产；另一种方法是将水生生物的卵子在开水中煮熟后，用刀片把卵子从中间切开，观察卵子内核向动物极偏移的情况，计算极化指数，据此推断卵子的发育成熟度，但这种方法只能人为判断卵子的成熟情况，不能鉴别卵子发育质量的好坏。还有一种方法是直接将卵子与正常的精子进行受精，计算受精率、出膜率，但这种方法试验周期长，且容易受到外界环境因子的干扰，可能影响最后的统计结果。因此，到目前为止，尚缺少一种有效的方法来鉴别水生生物卵子的质量。

发明内容

本发明需要解决的问题是提供一种鉴别斑尾刺虾虎鱼卵子质量的方法。

本发明的技术方案是在斑尾刺虾虎鱼的繁殖季节，收集成熟的亲本若干尾，采集一定数量的不同批次的成熟卵，制备组织匀浆后，其特征是用试剂盒分别测定不同批次卵子中总ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的活性，如果卵子中总ATP酶的活性高于36.31±2.50U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0.12±0.008U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性高于17.875±0.559U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性高于191.876±10.672U/gprot，判断为卵子质量较好；如果卵子中ATP酶的活性介于7.006±0.414U/mgprot和36.31±2.50U/mgprot之间，肌酸激酶的活性介于0.022±0.014U/mgprot和0.12±0.008U/mgprot之间，琥珀酸脱氢酶的活性介于3.935±0.64U/mgprot和17.875±0.559U/mgprot之间，乳酸脱氢酶的活性介于32.09±4.09U/gprot和191.876±10.672U/gprot之间，则判断为卵子质量一般；如果卵子中ATP酶的活性低于7.006±0.414U/mgprot，肌酸激酶的活性低于0.022±0.014U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性低于3.935±0.64U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性低于32.09±4.09U/gprot，则判断为卵子质量差。

本发明针对不同质量卵子中几种重要的参与能量代谢的酶的活性存在较大差异，减少人为和外界环境因子的影响，更为客观准确地反应了卵子的质量，所用设备简单，价格低廉，可节省时间和成本。

具体实施方式

本发明在斑尾刺虾虎鱼的繁殖季节，收集成熟的亲本若干尾，每批次取5尾鱼的成熟卵，超声波离心后制备成10％的组织匀浆，用试剂盒(南京建成生物工程研究所)在分光光度计下分别测定不同批次成熟卵中总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性，每个样重复三次，结果取平均值，运用统计软件对结果进行分析处理。如果卵子中总ATP酶的活性高于36.31±2.50U/mgprot，CK的活性高于0.12±0.008U/mgprot，SDH的活性高于17.875±0.559U/mgprot，LDH的活性高于191.876±10.672U/gprot，判断为卵子质量较好；如果卵子中ATP酶的活性介于7.006±0.414U/mgprot和36.31±2.50U/mgprot之间，CK的活性介于0.022±0.014U/mgprot和0.12±0.008U/mgprot之间，SDH的活性介于3.935±0.64U/mgprot和17.875±0.559U/mgprot之间，LDH的活性介于32.09±4.09U/gprot和191.876±10.672U/gprot之间，则判断为卵子质量一般；如果卵子中ATP酶的活性低于7.006±0.414U/mgprot，CK的活性低于0.022±0.014U/mgprot，SDH的活性低于3.935±0.64U/mgprot，LDH的活性低于32.09±4.09U/gprot，则判断为卵子质量差。运用这种方法鉴别斑尾刺虾虎鱼卵子的质量较为准确和客观，鉴别准确率可达到98％以上。