[发明专利]一种鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量的方法

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及到一种鉴别罗氏沼虾胚胎发育质量的方法。

背景技术

在生产实践中，水生生物胚胎发育质量的好坏直接影响养殖生产效益的高低，因此，客观准确评价水生生物胚胎发育质量的好坏具有非常重要的理论意义与应用价值。在评价水生生物胚胎发育质量的好坏时，目前主要有以下几种方法：一、利用显微镜直接观察在不同发育时期水生生物胚胎的发育情况，这种方法需要不间断地取样进行拍照观察；二、通过体外培养的方法，统计最后的孵化率、出膜率和成活率等，这种方法受外界环境因子较多，且随着不同鱼类的早期发育时间的长短试验周期会有较大变化。

发明内容

本发明需要解决的问题是提供一种准确判别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量的方法。

本发明配备试剂盒、紫外分光光度计，其特征是在罗氏沼虾的繁殖季节，收集一定数量的抱卵虾，分批采集前无节幼体期的胚胎，这个时期胚胎的发育特征如下：胚区似桥细胞群相继形成三对附肢原基，包括两对触角原基和一对大颚原基，位于各附肢原基的内侧形成神经节原基；用这个时期的胚胎制备组织匀浆，用试剂盒分别测定不同批次胚胎中总ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的活性，如果胚胎中总ATP酶的活性高于1.322±0.162U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0.404±0.015U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性高于2.067±0.139U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性高于352.225±23.214U/gprot，为胚胎质量较好；如果胚胎中ATP酶的活性介于0.087±0.003U/mgprot和1.322±0.162U/mgprot之间，肌酸激酶的活性介于0.010±0.002U/mgprot和0.404±0.015U/mgprot之间，琥珀酸脱氢酶的活性介于0.552±0.138U/mgprot和2.067±0.139U/mgprot之间，乳酸脱氢酶的活性介于5.890±0.658U/gprot和352.225±23.214U/gprot之间，为胚胎发育质量一般；如果胚胎中ATP酶的活性低于0.087±0.003U/mgprot，肌酸激酶的活性低于0.010±0.002U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性低于0.552±0.138U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性低于5.890±0.658U/gprot，则为胚胎发育质量差。

本发明通过测试胚胎发育中几种重要酶活性的高低，结合本方法提供的区分胚胎发育质量的鉴别数据来判别胚胎发育质量的好坏，与常用方法相比，减少了通过人为观察判断的主观因素，并可同时检测不同批次数量大的样本，检测时间短，具有鉴别准确和客观的显著效果，鉴别准确率可达到98％以上。利用本方法鉴别出的胚胎，质量好的胚胎出膜率可达到90％以上，质量一般的胚胎出膜率只有60％左右，质量差的胚胎基本不能正常孵化出膜。本发明所用仪器设备简单，只需一台普通的分光光度计，成本低廉。

具体实施方式

在罗氏沼虾的繁殖季节，购买一定数量的抱卵虾，每批次取5尾前无节幼体期的胚胎，超声波离心后制备成10％的组织匀浆，用试剂盒(南京建成生物工程研究所出品的试剂盒)在分光光度计下分别测定不同批次前无节幼体期胚胎中总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性，每个样重复三次，结果取平均值，运用统计软件对结果进行分析处理。如果胚胎中总ATP酶的活性高于1.322±0.162U/mgprot，CK的活性高于0.404±0.015U/mgprot，SDH的活性高于2.067±0.139U/mgprot，LDH的活性高于352.225±23.214U/gprot，判断为胚胎质量较好；如果胚胎中总ATP酶的活性介于0.087±0.003U/mgprot和1.322±0.162U/mgprot之间，CK的活性介于0.010±0.002U/mgprot和0.404±0.015U/mgprot之间，SDH的活性介于0.552±0.138U/mgprot和2.067±0.139U/mgprot之间，LDH的活性介于5.890±0.658U/gprot和352.225±23.214U/gprot之间，则判断为胚胎发育质量一般；如果胚胎中总ATP酶的活性低于0.087±0.003U/mgprot，CK的活性低于0.010±0.002U/mgprot，SDH的活性低于0.552±0.138U/mgprot，LDH的活性低于5.890±0.658U/gprot，则判断为胚胎发育质量差。

运用这种方法鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎质量较为准确和客观，鉴别准确率可达到98％以上。