[发明专利]炎症因子TNFα刺激人ACAT1基因表达

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和基因治疗领域，更具体而言，涉及炎症条件下的人ACAT1基因表达调控研究领域。

背景技术

动脉粥样硬化是导致冠心病、中风等心脑血管病的最危险因子。由ACAT合成的胆固醇酯在泡沫细胞内的聚集是动脉粥样硬化病灶中形成的主要标志。

在动脉粥样硬化形成过程中，酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶(ACAT，Acyl-coenzyme A：cholesterol acyltransferase，EC2.3.1.26)起着重要的作用。

ACAT是人细胞内唯一催化长链脂肪酸和游离胆固醇形成胆固醇酯的酶，在生物体内发挥重要的生理功能，是维持体内胆固醇及其脂类代谢平衡的关键酶之一。ACAT在生命细胞游离胆固醇更新变化、维持血液胆固醇水平等平衡代谢中起关键作用，病理上与胆固醇及其脂类代谢平衡紊乱引起的动脉粥样硬化病变、高胆固醇血症、老年性痴呆症(Alzheimer′s disease)等疾病直接相关，是国际前沿密切关注的极重要的筛药靶标。

长期以来，筛选ACAT的特异的抑制剂成为一些制药公司竞相研究的热点。

但这些抑制剂的特异性较差，毒副作用较大。而且，由于天然形式的ACAT蛋白还没有纯化成功，因此寻找ACAT特异有效的抑制剂还很困难。所以，开展基因水平的工作，对深入研究ACAT的作用机制与结构功能及其与相关疾病的关系，显得极为重要，这也是目前唯一切实可行的途径。

ACAT包括ACAT1和ACAT2。ACAT1基因(Acatl)在人体组织细胞广泛表达，而ACAT2基因(Acat2)主要在肝肠组织细胞特异表达。

1993年，美国达特茅斯(Dartmouth)医学院Chang TY实验室首次克隆具有活性功能的人ACAT1 cDNA(4011bp)，其开放阅读框编码550个氨基酸序列(Chang TY等，1993，J Biol Chem，268：20747-20755)。ACAT1 cDNA及其编码的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

发明人实验室对ACAT进行了系统深入的研究，发表了人ACAT1基因组DNA组织结构、启动子序列，并且发现人ACAT1 mRNA序列分别来自于两条不同的染色体(Li BL等，J Biol Chem，1999，274：11060-11071)；发现与动脉粥样硬化发生密切相关的细胞因子IFN-γ和糖皮质激素地塞米松(Dex)可增强启动子活性而提高人ACAT1基因的表达(Yang JB，等，J Biol Chem，2001，276：20989-20998；Yang L等，Cell Res，2004，14：315-323)。此外，ACAT1在动脉粥样硬化斑块中高表达，特别是在单核/巨噬细胞中(Chang TY等，1997，Annu Rev Biochem，66：613-638；Miyazaki A等，1998，Arterioscler Thromb VascBiol，18：1568-1574)。这些表明ACAT1基因功能的重要性和复杂性。

TNFα是一种广泛存在的炎症因子，在应对外界感染、参与免疫应答以及阻止肿瘤的发生中有着重要的作用(Aggarwal BB等，1996；Ware CF等，1996)。

人TNFα具有26kD跨细胞膜的前体形式，被酶解而加工成为17kD含有157个氨基酸的成熟形式，被分泌到细胞外(Vilcek J等，1991)。活化的淋巴细胞、巨噬细胞、内皮细胞和平滑肌细胞都能分泌TNFα(Libby P等，1991)。