[发明专利]鉴别日本鳗鲡精子活力的方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖鱼类精子活力检测。

背景技术

日本鳗鲡是优良的水产养殖对象，也是出口创汇的当家品种，到目前为止，日本鳗鲡的人工繁殖仍属世界难题，获得正常的、活力好的精子是成功实现其人工繁殖的前提条件之一。在日本鳗鲡的人工繁殖过程中，都需要对亲本进行催熟和催产处理，不同的催产方法和药物剂量都会对精子的活力产生较大影响，因此，客观准确评价日本鳗鲡精子的活力具有非常重要的理论意义与应用价值。在评价鱼类精子活力时，目前主要有以下几种方法：一、利用普通显微镜观察记录精子的活动状况和运动时间，这种方法受人为因素的影响较大，不能客观反应精子的活动状况；二、利用鱼类精子直接开展受精试验，统计受精率、孵化率、出膜率等，这种方法受外界环境因子较多，且随着不同鱼类的早期发育时间的长短周期有较大变化；三、用计算机辅助分析系统(CASA)分析精子的运动速率和运动距离等，这种方法能客观反应精子的活动情况，但仪器设备较为昂贵。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种鉴别日本鳗鲡精子活力的方法。

本发明的技术方案配备试剂盒、紫外分光光度计，采集日本鳗鲡精子，其特征是用试剂盒在紫外分光光度计下分别测定精子中总ATP酶、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性，精子中ATP酶的活性高于3.14±0.61U/ml，LDH的活性高于2266.67±313.25U/L，SOD的活性高于220.47±32.94U/ml，CAT的活性高于48.51±5.94U/ml，为精子活力较好；精子中ATP酶的活性介于1.83±0.43U/ml和3.14±0.61U/ml之间，LDH的活性介于1195.91±198.51U/L和2266.67±313.25U/L之间，SOD的活性介于84.16±22.11U/ml和220.47±32.94U/ml之间，CAT的活性介于21.8±4.14U/ml和48.51±5.94U/ml之间，为精子活力一般；精子中ATP酶的活性低于1.83±0.43U/ml，LDH的活性低于1195.91±198.51U/L，SOD的活性低于84.16±22.11U/ml，CAT的活性低于21.8±4.14U/ml，为精子活力差。

本发明的突出特点是研究了经过不同催产方法处理的日本鳗鲡精子，相关能量代谢酶和抗氧化酶活性有较大变化，提供了鉴别精子中总ATP酶、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的相应数据，并通过精子相关能量代谢酶活性检测，根据酶活性的高低鉴别日本鳗鲡精子的活力。运用这种方法鉴别日本鳗鲡精子活力较为准确和客观，鉴别率可达到98％以上。

具体实施方式

在日本鳗鲡的繁殖季节，用不同的方法分别催产日本鳗鲡的精子，采集经不同催产方法获得的精子，每组取5尾鱼精子，用试剂盒(按照南京建成生物工程研究所公开的该产品操作指导书进行)在紫外分光光度计下分别测定每组精子中总ATP酶、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性，每个样重复三次，结果取平均值，运用统计软件对结果进行分析处理，精子中ATP酶的平均活性高于3.14±0.61U/ml，LDH的平均活性高于2266.67±313.25U/L，SOD的平均活性高于220.47±32.94U/ml，CAT的平均活性高于48.51±5.94U/ml，为精子活力较好；精子中ATP酶的平均活性介于1.83±0.43U/ml和3.14±0.61U/ml之间，LDH的平均活性介于1195.91±198.51U/L和2266.67±313.25U/L之间，SOD的平均活性介于84.16±22.11U/ml和220.47±32.94U/ml之间，CAT的平均活性介于21.8±4.14U/ml和48.51±5.94U/ml之间，则为精子活力一般；精子中ATP酶的平均活性低于1.83±0.43U/ml，LDH的平均活性低于1195.91±198.51U/L，SOD的平均活性低于84.16±22.11U/ml，CAT的平均活性低于21.8±4.14U/ml，则为精子活力差。