[发明专利]钒酸盐氧化法检测总胆红素试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及生物试剂技术。具体涉及一种钒酸盐氧化法检测总胆红素试 剂盒。

背景技术：

胆红素(bilirubin)是血红素的代谢产物，主要在肝脏内经结合作用转化、 排泄；它在血清中可以三种形式存在：未结合胆红素(BU，即游离胆红素)、 结合胆红素(Bc：单葡萄糖醛酸Bcm和双葡萄糖醛酸胆红素Bcc之和)以及胆红 素(白蛋白共价连接胆红素)。胆红素为一种有效的抗氧化剂，具有捕获氧自 由基的能力，能保护脂类和脂蛋白不被氧化。它与人体内其它抗氧化防御系 统协同作用，与白蛋白结合后存在于心室的肌细胞部位，阻止该部位产生氧 自由基，可调节心肌细胞的胆红素抗氧化活性，保护心室肌细胞不受氧自由 基的损害。因此，当胆红素浓度降低时，冠心病的危险增加。

胆红素是临床上判定黄疸的重要依据，也是肝功能的重要指标。如果胆 红素总量增高、间接胆红素增高，就意味着可能有下列症状：溶血性贫血， 血型不合输血，恶性疾病和新生儿黄疸等。如果直接与间接胆红素均增高， 可能有下列症状：急性黄疸型肝炎，慢性活动性肝炎和肝硬变等。而胆红素 总量和直接胆红素增高，则表明可能为肝内及肝外阻塞性黄疸，胰腺癌，毛 细胆管型肝炎及其他胆汁瘀滞综合症。中毒性肝炎会导致胆红素总量增高、 直接与间接胆红素均增高。

正常血清总胆红素浓度为1.7～17.1μmol/L，其中直接胆红素低于 3.4μmol/L。当总胆红素达34μmol/L时，临床上即可发现黄疸；如血清总胆红 素超过正常范围，而肉眼看不出黄疸时，则称为隐性黄疸，黄疸最常见于肝 胆疾病，但其他系统疾病也可能出现。

目前，总胆红素测定的方法主要有重氮法、钒酸盐氧化法和酶氧化法。 重氮试剂法历史最久，至今仍应用最广。通常有J-G法和M-E法。前者是 在胆红素与重氮试剂反应后产生的重氮胆红素使之在碱性条件下由红色变 成绿色。光谱的转移增加了反应的灵敏度和特异性，在绿色环境中基本不干 扰，但是这一改变增加了自动化的难度。因此采用该方法往往只能手工操作。 M-E法是在重氮胆红素生成后直接比色(红色)，手续简单，易于自动化是优 点，但特异性差，溶血样品的结果严重受扰。由于重氮法历史悠久，医学上 有关胆红素的各种论述均以此法为基础。但是它存在缺陷：其一是重氮试剂 不稳定，它必须由亚硝酸钠和氨基苯磺酸临时生成，生成后最多只能用2天 (一般6小时)；其二是重氮试剂与间胆和总胆的反应特异性不佳，在一定条件 下测总胆，一部分间胆会参与反应，如果反应时间延长，参与的更多，导致 测值的不准确，而且该方法的操作繁复、试剂不稳定、反应不专一。针对上 述问题，人们作过无数的改良，但至今仍无满意的结果。

氧化酶法，特异性好，但是酶的稳定性较差，价格偏高，成本高，不可 能大面积普及。

化学氧化法，使用化学氧化法测胆红素的渊源很早，70年代就采用铁氰 化钾除滴定法测钙时的胆红素干扰，以后也曾有报道用铁氰化钾法测总胆。 但也都停留在方法学的探讨上，而没有实际应用价值。1993年日本学者To -kuda发表钒酸盐氧化法测血清中胆红素。但该方法必须保证反应的专一 性，还要防止氧化反应的早、中、晚期可能出现的干扰和副反应。这类化合 物除钒酸和亚硝酸钠外还有过苯甲酸钠、过硫酸钠、乙酸锰(III)、硫酸铜、 硫酸铁等。从上述的比较来看，钒酸盐氧化法测定胆红素具有简单、特异的 特点。

目前钒酸盐氧化法测胆红素技术虽然已能进入临床应用.但还不完善，在 总胆红素的测量过程中存在偏钒酸难于溶解的问题，在溶液中呈胶体状，使 得试剂本底升高。特别是在酸性条件下溶解度会大大降低，偏钒酸根离子迅 速析出，使溶液的本底升高，严重影响反应。如果降低浓度，会使反应不完 全，测量结果降低！而升高试剂反应的pH值，会增加很多副反应，特别是抗 坏血酸对试剂的干扰特别严重，严重影响检测结果。但是，钒酸完全溶解需要 较高的温度，而自动生化仪上的温度一般是4-8度，钒酸在此温度下在一般 的缓冲液中会立刻析出，导致检测不能进行。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，提供一种促进钒酸 完全溶解，提高试剂抗干扰性的钒酸盐氧化法检测总胆红素的试剂盒。

本发明基于下列原理：

(1)选用有效的物质来消除抗坏血酸干扰的反应。其中钒酸氧化的抗 干扰剂为FeCl₂或TrionX-100(表面活性剂)；