[发明专利]甘蓝型油菜隐性核不育纯合型不育株的无性扩繁及全不育系生产技术

说明书

技术领域

甘蓝型油菜隐性核不育的杂种优势利用领域

背景技术

1甘蓝型油菜隐性核不育性的遗传规律

甘蓝型油菜隐性核不育性受3对隐性基因控制，为了便于描述其遗传，我们将三种隐性基因分别命名为a、b和rf，其中a和b为隐性不育基因，rf为隐性上位基因，能抑制a和b不育基因的表达，使育性恢复可育。不育株有2种基因型，aabbRfRf为纯合型不育株，aabbRfrf为杂合型不育株。可育株有25种基因型，其中aaBbRfRf和AabbRfRf自交育性分离比例为3∶1，aaBbRfrf和AabbRfrf自交育性分离比例为13∶3，AaBbRfRf自交育性分离比例为15∶1，AaBbRfrf自交育性分离比例为61∶3，其余19种可育基因型自交没有育性分离。三隐性纯合体aabbrfrf作为父本，与纯合型不育株杂交，后代为100％的不育株。基因型为AA、BB或AABB的可育株可作为恢复系，与不育株杂交，后代为100％的可育株(表1)。

表1甘蓝型油菜隐性核不育性的遗传规律

根据甘蓝型油菜隐性核不育性的遗传规律，纯合两型系内不育株与可育株杂交，不育株上产生的后代基因型与亲代相同，2种基因型始终各占50％，因而能稳定遗传(图1)。

2纯合两型系的繁殖

将隐性核不育纯合两型系播种到隔离大棚中，在油菜花期通过育性观察，选取纯合两型系中的不育株(基因型为aabbRfRf)挂牌，在人工隔离的条件下，纯合两型系中的可育株(基因型为AabbRfRf或aaBbRfRf)作为唯一的花粉源，对不育株进行充分授粉，成熟后，将挂牌的不育株收获、脱粒，其种子就为纯合两型系。

3全不育系生产

用甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系为母本，临保系为父本，在初花期将母本行纯合两型系中的50％可育株拔除，由临保系对母本行中剩余的不育株授粉，成熟后，从母本行收获的种子就是全不育系种子。

发明内容

本发明的目的在于寻找一种简便、高效的方法，使纯合两型系中的不育株能够得到大量繁殖，从而简化全不育系的生产步骤，提高全不育系的种子纯度。

利用原有技术，因母本行的纯合两型系存在可育株，在生产全不育系时，必须人工将可育株拔除。但因母本行的可育株迟拔或漏拔，导致生产的全不育系存在一定比例的可育株，从而影响后期商品杂交种的生产。

本项发明利用甘蓝型油菜的离体培养与无性繁殖技术，可以根据实际需求对纯合两型系中的不育株(基因型为aabbRfRf)进行大量繁殖，然后以这些大量繁殖的不育株为母本生产全不育系。由于在母本行中彻底排除了可育株(基因型为AabbRfRf或aaBbRfRf)，因而减少了人工拔除可育株的步骤，提高了制种产量，同时由于在隔离条件下临保系成了唯一的花粉源，由此获得的全不育系种子纯度达100％。

本发明是这样实现的：

2006年3月28日，在油菜花期，根据油菜育性观察的结果，从甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系20118AB中挑选出三株生长势强的不育株，分别编号为20118A1、20118A2和20118A3，分别摘取其幼嫩的侧枝，然后以固体B5培养基对这些外植体进行离体培养。为了进一步确定三个不育单株的基因型，我们利用该纯合两型系中的可育株(基因型为AabbRfRf)和临保系(基因型为aabbrfrf)为父本，对这些不育株进行测交鉴定，根据表2测定的结果可以确定20118A1和20118A2的基因型为aabbRfRf，由于20118A3与临保系的测交后代中出现了3株可育株，其基因型有待进一步确定，因而20118A3被摈弃。通过油菜离体培养技术，分别获得了不育株20118A1和20118A2的无菌试管苗。