[发明专利]草鱼的雌核发育方法及其应用

权利要求书

1.一种草鱼的雌核发育方法，其特征在于：该方法是以适度灭活后的异源四倍体鲫鲤二倍体精子为刺激源，刺激草鱼成熟卵子，激活后2～3min，用4℃～6℃的水冷休克处理10～12min，然后经流水控温孵化，制备得到抑制第二极体排出的雌核发育草鱼；

所述适度灭活的具体操作为：挤出达到性成熟的异源四倍体鲫鲤精液于培养皿中，用Hank’s液稀释精液，Hank’s液与精液的体积比为4∶1，稀释的精液在培养皿中以薄层分布，把盛精液的培养皿放在垫有冰袋的摇床上进行离心处理，转速为40～50r/min，并置于两支功率分别为15W的紫外灯下照射处理，紫外灯与精液的距离为10～12cm，照射时间为20～30min，镜检时精子尾部摆动减弱且80％～90％的精子仍具有良好的游动活力，此时将灭活好的精液避光置于4℃冰箱中保存；

所述Hank’s液的配方如下：KCL 0.40g、NaCl 8.00g、NaHCO₃ 0.35g、KH₂PO₄ 0.06g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.09g、Na₂HPO₄·12H₂O 0.10g、MgSO₄·7H₂O 0.10g、MgCl₂·6H₂O 0.10g、CaCl₂0.14g和葡萄糖1.00g；加蒸馏水配至1L。

2.一种草鱼的雌核发育方法，其特征在于：该方法是以适度灭活后的异源四倍体鲫鲤二倍体精子为刺激源，刺激草鱼成熟卵子，受精后20～22min，用4℃～6℃的水冷休克处理10～12min，然后经流水控温孵化，制备得到抑制第一次卵裂的雌核发育草鱼；

所述适度灭活的具体操作为：挤出达到性成熟的异源四倍体鲫鲤精液于培养皿中，用Hank’s液稀释精液，Hank’s液与精液的体积比为4∶1，稀释的精液在培养皿中以薄层分布，把盛精液的培养皿放在垫有冰袋的摇床上进行离心处理，转速为40～50r/min，并置于两支功率分别为15W的紫外灯下照射处理，紫外灯与精液的距离为10～12cm，照射时间为20～30min，镜检时精子尾部摆动减弱且80％～90％的精子仍具有良好的游动活力，此时将灭活好的精液避光置于4℃冰箱中保存；

所述Hank’s液的配方如下：KCL 0.40g、NaCl 8.00g、NaHCO₃ 0.35g、KH₂PO₄ 0.06g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.09g、Na₂HPO₄·12H₂O 0.10g、MgSO₄·7H₂O 0.10g、MgCl₂·6H₂O 0.10g、CaCl₂0.14g和葡萄糖1.00g；加蒸馏水配至1L。

3.根据权利要求1或2所述的雌核发育方法，其特征在于，所述流水控温孵化时的温度为21℃～26℃。

4.一种用权利要求1～3中任一项雌核发育方法制备得到的雌核发育草鱼与性反转的雌核发育草鱼纯系进行自交，使所述雌核发育草鱼的性状进行稳定遗传的方法。

5.一种用权利要求1～3中任一项雌核发育方法制备得到的雌核发育草鱼作为母本、以普通草鱼作为父本进行杂交的方法。