[发明专利]一种用于铬渣污染场地修复的菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于环境污染处理的菌株，特别涉及一种铬还原功能菌。

背景技术

六价铬是一种毒性较大致癌、致畸、致突变剂物质。环境中铬污染主要来自于电镀、制革、油漆、印染等行业含铬废水的排放以及金属铬和铬盐生产行业产生的固体废物——铬渣。微生物修复铬污染的方法由于其成本低、无二次污染和操作简单等优点而日益引起广大环保工作者极大的兴趣。分离获得高效的铬还原功能菌一直是研究者们致力开展的一项工作。国内外在这方面的报道较多，已分离具有还原六价铬能力的细菌有多种，主要有脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)、假单胞菌(Pseudomonassp.)、希瓦氏菌(Shewanella sp.)、大肠杆菌(Escherichia coli sp)等。但是，迄今为止，尚未有关于Pannonibacter phragmitetus还原六价铬的报道。因此，本发明为六价铬污染微生物修复提供了新的微生物资源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的铬还原功能菌株，该菌株具有将六价铬还原为三价铬的功能，将该菌株用于铬污染的治理，成本低，操作简单。

发明人采集湖南铁合金厂铬渣堆放场污染土壤，经过筛选、分离、驯化，得到一种具六价铬还原特性的菌株，经鉴定，该菌株16s rRNA基因序列与Pannonibacter phragmitetus sp.16S rRNA有99％的相似性，命名为Pannonibacter phragmitetus BB。该菌株已于2009年5月8日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)提交生物保藏，保藏号为CGMCCNo.3052。该菌株可广泛用于铬渣污染场地修复。

本发明中，筛选、分离、驯化该菌株的过程为：采集湖南铁合金厂铬渣堆放场下土壤，在液体培养基中，30℃恒温培养箱中生长3～4天；稍振荡，上部泥浆按稀释梯度接种于含有50～250mg/L六价铬浓度的固体培养基中，挑取不同形态菌，于含有50～250mg/L六价铬浓度的液体培养基中，30℃振荡培养；挑取已纯化的单菌落，逐步提高铬浓度，进行驯化。

所述液体培养基组成为：5g/L乳酸钠、5g/L酵母膏和2g/L氯化钠，其余为水，用5mol/L NaOH调节pH＝9.5～9.8。所述固体培养基为：5g/L乳酸钠、5g/L酵母膏和2g/L氯化钠，15g/L琼脂。

附图说明

图1：本发明的菌株的菌落形态图；

图2：本发明的菌株形态图；

图3：本发明菌株的系统发育分析树；

图4：用本发明菌株还原Cr(VI)的还原效果图。

具体实施方式：

实施例1：本发明的铬还原菌的分离纯化及驯化

采集湖南铁合金厂铬渣堆放场下土壤，称取10g铬渣土壤于150mL已灭菌的锥形瓶中，加入10mL灭菌液体培养基(5g/L乳酸钠、5g/L酵母膏和2g/L氯化钠，其余为水，用5mol/L NaOH调节pH＝9.5～9.8)，于30℃培养箱中培养4天。随后取1mL泥浆按梯度稀释成10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8，用移液枪从10^-6、10^-7和10^-8稀释液中分别取0.1mL置于含有250mg/L Cr(VI)(以K₂Cr₂O₇溶液作为铬源)的固体培养基，固体培养基组成为：5g/L乳酸钠、5g/L酵母膏和2g/L氯化钠，15g/L琼脂。用三角棒充分涂匀，将平板倒置于30℃培养箱中培养4天。用无菌的接种针挑取不同形态的菌落，划线接种于含250mg/L Cr(VI)的固体培养基上，固体培养基组分同上。倒置，于30℃培养箱培养4天。

分别挑取已纯化的单菌落于上述含250mg/L Cr(VI)液体培养基中，液体培养基组成：5g/L乳酸钠、5g/L酵母膏和2g/L氯化钠，250mg/L Cr(VI)(以K₂Cr₂O₇溶液作为铬源)，其余为水，当培养基颜色从最初的黄色变为兰灰色时，培养液中Cr(VI)浓度低于检出限。检出限是指用分光光度法无法检出培养基中的Cr(VI)。