[发明专利]一种乳腺癌的分子标志物hsa-miR-374a及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种乳腺癌的分子标志物hsa-miR-374a及其应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，全球每年约有120万的新增乳腺癌病例，50万的死亡病例，具有发病率高、死亡率高的特点。导致乳腺癌高死亡率的其中一个原因就是乳腺癌的扩散转移，易发的转移部位包括肺、肝、脑、骨、胸膜等。近年来，我国的乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，严重危害女性的生命和健康。

微小RNA(microRNA)是广泛存在于真核生物中一组不编码蛋白质的短序列RNA，长度为20～24个碱基，具有高度保守性、时序性和组织特异性。它通过与靶基因的mRNA碱基特异性配对，促进mRNA的降解或抑制其翻译，从而实现对基因表达的调控作用。已有研究表明，microRNA在调节细胞生长、细胞凋亡、细胞运动、细胞分化以及胚胎发育过程中发挥重要作用。microRNA自身表达的异常在包括乳腺癌在内的多种肿瘤中已经得到验证，microRNA参与了乳腺癌的发生发展，提示它们在乳腺癌诊断、预后和治疗中可能具有广阔的应用前景。

现有技术的国内外文献检索中至今未见有关hsa-miR-374a与乳腺癌的关系的研究报道。

发明内容

本发明的目的提供一种新的乳腺癌的分子标志物。

本发明的乳腺癌的分子标志物为小分子非编码RNA基因hsa-miR-374a。发明人首先利用microRNA芯片技术检测了13例乳腺癌组织和两个正常乳腺组织中microRNA的表达谱，选取了其中的hsa-miR-374a，在临床切片中进一步验证hsa-miR-374a与乳腺癌的相关性，并在体外细胞培养水平进行深入的功能探讨。

本发明提出以小分子非编码RNA基因hsa-miR-374a作为乳腺癌的分子标志物，该分子标志物能诱导乳腺癌上皮细胞发生上皮间质转化，从而促进乳腺癌上皮细胞的浸润和转移能力。本发明的小分子非编码RNA基因hsa-miR-374a在乳腺癌组织中的表达显著高于正常乳腺组织，而且与乳腺癌的临床分级相关，同时，hsa-miR-374a在体外培养的乳腺癌细胞系中的表达显著高于正常的乳腺上皮细胞以及永生化的正常乳腺上皮细胞，提示了该基因在乳腺癌的临床诊断方面可能成为一种有效的标志物。该基因成熟体序列如SEQ ID NO.1所示的序列：

5’-UUAUAAUACAACCUGAUAAGUG-3’。

本发明还提供了本发明的乳腺癌的分子标志物在制备抗乳腺癌肿瘤药物中的应用，所述药物包含有效量的阻断剂，所述阻断剂能阻断小分子非编码RNA基因hsa-miR-374a的表达。hsa-miR-374a的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的序列。由于本发明的小分子非编码RNA基因hsa-miR-374a可以诱导乳腺癌上皮细胞发生上皮间质转化，可以促进乳腺癌上皮细胞的浸润和转移能力，当阻断hsa-miR-374a在乳腺癌上皮细胞中的表达时，可能可以有效抑制上皮间质转化的发生，甚至使已经发生上皮间质转化的细胞恢复上皮细胞特性，并且有效抑制乳腺癌上皮细胞的浸润和转移能力。

本发明为乳腺癌的诊断提供了一种新的分子标志物，即小分子非编码RNA基因hsa-miR-374a，而且利用寡义核苷酸技术开发出阻断hsa-miR-374a在乳腺癌上皮细胞中的表达的阻断剂作为全新的抗乳腺癌肿瘤药物，为乳腺癌的治疗提供新的有效途径。hsa-miR-374a分子还可能参与了乳腺癌发生发展过程中的其他环节，如细胞生长、细胞凋亡、血管生成等等，以及参与了其他类型肿瘤的发生发展过程。因此，本发明还对以后深入研究hsa-miR-374a的功能以及与其他肿瘤的关系提供了一定的经验和基础。

附图说明

图1是本发明实施例1中用实时定量RT-PCR方法检测hsa-miR-374a的表达水平；A：检测hsa-miR-374a在不同乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达水平；N1、N2表示2例正常乳腺组织，T1-T13表示13例乳腺癌组织；B：hsa-miR-374a在体外培养的各种乳腺癌细胞系和正常的乳腺上皮细胞以及永生化的正常乳腺上皮细胞中的表达水平；

图2是本发明实施例2中用原位杂交技术对不同临床级别的乳腺癌石蜡包埋组织切片的染色图；

图3是本发明实施例3中hsa-miR-374a的过表达对乳腺上皮细胞MCF-7形态的影响；A：建立稳定过表达hsa-miR-374a的MCF-7细胞株(MCF-7-374a)；B：MCF-7过表达hsa-miR-374a后由上皮细胞形态向间质细胞形态转变，并由克隆性生长向散落性生长转变；