[发明专利]用于检测甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸纳米金生物传感器

权利要求书

1.一种用于检测甲型流感病毒的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：包括从左到右依次固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸；

所述玻璃纤维上涂有纳米金标记寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针是由巯基修饰并与胶体金偶联形成的，该寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

所述硝酸纤维素膜上固定有两种寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针是用生物素标记并与链霉亲和素偶联形成的；固定于靠近吸水纸一端的寡核苷酸探针形成质控线，该寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；固定于靠近玻璃纤维一端的寡核苷酸探针形成检测线，该寡核苷酸探针包含如SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列。

2.一种用于检测甲型H1N1流感病毒的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：包括从左到右依次固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸；

所述玻璃纤维上涂有纳米金标记寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针是由巯基修饰并与胶体金偶联形成的，该寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；

所述硝酸纤维素膜上固定有两种寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针是用生物素标记并与链霉亲和素偶联形成的；固定于靠近吸水纸一端的寡核苷酸探针形成质控线，该寡核苷酸探针包含如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列；固定于靠近玻璃纤维一端的寡核苷酸探针形成检测线，该寡核苷酸探针包含如SEQ IDNO.6所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述质控线与检测线相距3-10mm；所述固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸的相邻部分彼此重叠1-5mm；所述胶体金的粒径为8-100nm。

4.含有如权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器的用于检测甲型流感病毒的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括：RT-不对称PCR反应试剂，包含：10倍RT-PCR缓冲液、镁离子、酶混合液、RNA酶抑制剂、上游引物、下游引物；其中，上游引物含有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，下游引物含有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；所述酶混合液是由Taq酶5U/μl和逆转录酶5U/μl以体积比1∶1混合组成。

6.含有如权利要求2所述的核酸纳米金生物传感器的用于检测甲型H1N1流感病毒的试剂盒。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括：RT-不对称PCR反应试剂，包含：10倍RT-PCR缓冲液、镁离子、酶混合液、RNA酶抑制剂、上游引物、下游引物；其中，上游引物含有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，下游引物含有如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列；所述酶混合液是由Taq酶5U/μl和逆转录酶5U/μl以体积比1∶1混合组成。

8.根据权利要求5或7所述的试剂盒，其特征在于：所述上游引物与下游引物之间的浓度比为10∶1-100∶1。