[发明专利]核酸纳米金生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种核酸纳米金生物传感器，其特征在于：包括从左到右依次固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸；

所述玻璃纤维上涂有纳米金标记寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针是由巯基修饰并与胶体金偶联形成的；

所述硝酸纤维素膜上固定有两种寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针是用生物素标记并与链霉亲和素偶联形成的；固定于靠近吸水纸一端的寡核苷酸探针形成质控线；固定于靠近玻璃纤维一端的寡核苷酸探针形成检测线。

2.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述质控线与检测线相距3-10mm。

3.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述固定于胶板上的样品垫、玻璃纤维、硝酸纤维素膜和吸水纸的相邻部分彼此重叠1-5mm。

4.根据权利要求3所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述的相邻部分彼此重叠2mm。

5.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述胶体金的粒径为8-100nm。

6.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述寡核苷酸为单链DNA或者RNA。

7.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于：所述的寡核苷酸探针是针对目的基因片段设计合成的寡核苷酸探针；其中，涂在玻璃纤维上的寡核苷酸探针与目的基因特异性互补，固定在硝酸纤维素膜上的两种寡核苷酸探针中，固定于检测线的探针与目的基因特异性互补，固定于质控线的探针与涂在玻璃纤维上的寡核苷酸探针特异性互补。

8.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，所述的纳米金标记寡核苷酸探针的制备方法包括以下步骤：

1)纳米金的制备：选用粒径为8-100nm的胶体金颗粒，胶体金采用常规的氯金酸煮沸还原法制备，通过控制还原剂的量在0.01％-0.05％以及搅拌速度在1000-50000转之间来控制颗粒粒径；

2)寡核苷酸探针分子设计及修饰合成：针对目的基因片段设计合成三条寡核苷酸探针，三条寡核苷酸探针与模板DNA的关系及三者之间的关系为：DNA探针1和DNA探针2分别与所测样品中模板DNA特异性互补，DNA探针3与DNA探针2特异性互补，该DNA探针2的5’端或3’端采用巯基修饰合成；

3)纳米金与寡核苷酸探针的偶联与封闭老化：将上述巯基修饰的寡核苷酸探针加入到5倍体积浓缩的纳米金溶液中，混合，在4-37℃反应10-24小时，用10％牛血清白蛋白封闭多余的活性位点，30分钟后加入NaCl和SDS使其终浓度分别至0.15M和0.01％，老化10-20小时后，10000-16000转/分钟离心20-60分钟，弃上清，即可获得所述的纳米金标记寡核苷酸探针，将此纳米金标记寡核苷酸探针沉淀用重悬液重新悬浮，4℃保存。

9.根据权利要求1所述的核酸纳米金生物传感器，其特征在于，所述的样品垫是经过以下处理的：采用含0.25％TritonX-100、0.05M Tris-HCL、0.15M氯化钠的混合液浸泡玻璃纤维4个小时后，37℃烘干。