[发明专利]一种检测登革病毒NS1抗原的免疫诊断试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种医用配制品，特别是用于诊断登革病毒的试剂盒。 

背景技术

登革热是目前仅次于疟疾的重要虫媒性传染病，主要流行于热带和亚热带地区；由于旅游业和国际贸易的发展、生态环境的改变、全球人口的增长并向城市集中化以及全球气候变暖等因素的改变，登革病毒的传播已不再局限于部分地区，而是随着人口的流动在全球大部分地区迅速传播。据WHO统计，每年发生登革病毒感染患者超过1亿人，其中50万人发展成为登革出血热，每年死亡人数高达3万人。目前，全球有将近25亿的人口生活在登革热的疫区中，备受登革病毒感染的威胁。总而言之，登革病毒所引起的登革热和登革出血热已成为热带、亚热带地区的一个非常严重的公共卫生问题。 

登革病毒有4个血清型，分别为I型、II型、III型和IV型(DV1、DV2、DV3和DV4)。任何一种血清型的感染均可引起一系列的临床症状，包括隐匿性感染、典型登革热以及导致高死亡率发生的登革出血热或登革休克综合征。初次感染登革病毒对于同型病毒的再次感染可产生长久的免疫力，但对其他血清型的再次感染仅能产生部分而且短暂的免疫保护作用。由于存在抗体依赖的病毒感染增强作用，异型登革病毒再次感染是发生登革出血热或登革休克综合征的主要危险因素。由于在一个地区存在不同血清型登革病毒的交替流行，人群普遍易感，这就更增加了登革出血热发生的可能性。 

目前，具有保护性的登革病毒疫苗尚未研制成功，临床上对于登革病毒的感染亦未有特异性的治疗措施。但实践表明及时采取临床救治措施可以大大减少登革出血热的发病率和死亡率，因此登革热的治疗很大程度上取决于早期感染的诊断。由于多数登革病毒感染者早期缺乏特异的临床表现，仅有发热、寒战等流感样症状，难以和其它发热疾病和出血热疾病区分，因此，登革病毒感染的确诊依赖于实验室的诊断手段。目前，登革病毒的实验室诊断方法主要包括病毒分离、血清学检测和核酸检测。其中病毒分离是登革病毒感染诊断和血清型鉴定的金标准，但该方法费时而且对于实验室的条件要求较高。尽管病毒核酸的检测方法比传统的病毒分离法更灵敏、快速，但分子诊断操作相对繁琐，对技术水平要求较高，并较易发生污染导致假阳性结果，同时由于毒株变异、潜在突变等序列改变也可能引起假阴性结果。而抗体检测试剂不能用于早期诊断，而且由于4个血清型登革病毒之间以及与其它黄病毒存在血清学交叉反应，特别是接种乙型脑炎病毒、黄热病毒疫苗的人群易发生抗体假阳性反应结果。因此，建立一种快速、可靠、标准化的实验室诊断登革病毒以及各血清型别感染的早期检测试剂显得非常必要。 

登革病毒的非结构蛋白1(nonstructural protein 1，NS1)是一种相对保守的糖蛋白，分子量为45～50kDa，有膜型和分泌型两种形式，在感染细胞中高度表达，在登革病毒的研究中已经将它作为诊断登革热的靶抗原。研究发现在登革热患者的早期血中存在高浓度的NS1循环抗原，因此检测急性期病人血清中的循环NS1抗原可用于早期诊断登革病毒感染。目前已报道了几种基于多克隆抗体的检测登革病毒NS1的抗原捕获ELISA法，但是这些方法都是在多克隆抗体的基础上建立的，在不同批次的抗血清中存在很大差异，难以重复和实现实验室的标准化；而利用抗NS1的单克隆抗体来检测登革病毒的商品化试剂盒只有两种：Pan-EDengue Early ELISA test Kit，Panbio，Queensland，Australia；PLATELIATM DENGUE NS1 AG，Bio-Rad，France，该试剂盒含有抗I～IV型登革病毒NS1的单克隆抗体，通过ELISA方法来实现登革病毒感染的早期诊断，其敏感度、特异性和稳定性都比较好。但本发明人进一步研究发现，试剂盒(Pan-E Dengue Early ELISA test kit，Panbio，Queensland，Australia)对I～IV型的登革病毒的敏感度不同，尤其对III型和IV型登革病毒检测的敏感性很低，而早期感染登革病毒的患者血液样本中的病毒含量相对较低，用该试剂盒检测III型和IV型登革病毒的感染有可能会出现漏检现象，不利于临床实践应用。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提高检测登革病毒NS1抗原的免疫诊断试剂盒的灵敏度，缩小登革病毒四个血清型NS1抗原检测敏感度间的差异性。 

本发明解决上述问题的技术方案是：