[发明专利]动物华支睾吸虫病特异性检测引物、检测方法和检测试剂盒

权利要求书

1、一种动物华支睾吸虫病特异性检测引物，其上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2、一种动物华支睾吸虫病特异性检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)华支睾吸虫囊蚴DNA的提取或虫卵DNA的提取；

(2)用权利要求1所述特异性检测引物采用常规PCR技术进行扩增；

(3)扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，紫外光下观察特异性扩增条带，即可判断样品中是否含有动物华支睾吸虫病。

3、根据权利要求2所述特异性检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，PCR扩增条件为94℃预变性5分钟；94℃变性30秒、61℃退火30秒、72℃延伸30秒，30个循环；72℃后延伸5分钟。

4、根据权利要求2所述特异性检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，PCR扩增体系为：总体系2.5ml，含有权利要求1所述动物华支睾吸虫病特异性检测引物各0.5pmol/μl、10mM的pH8.3的Tris-HCl、50mM的KCl、4个dNTP各200μM、2.5mM的MgCl₂和0.625U的Taq DNA聚合酶。

5、一种动物华支睾吸虫病特异性检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括如下部分：

a.PCR反应液：总2.5ml，含有权利要求1所述动物华支睾吸虫病特异性检测引物各0.5pmol/μl、10mM的pH8.3的Tris-HCl、50mM的KCl、4个dNTP各200μM和2.5mM的MgCl₂；

b.阳性对照品：华支睾吸虫阳性DNA，100μl；

c.阴性对照品：无DNA超纯水，100μl。

6、根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于该试剂盒还包括Taq DNA聚合酶，5U/μl，12.5μl。

7、根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于该试剂盒还包括如下部分：

DNA裂解液30ml：含有100mM的NaCl、10mM的pH8.0的Tris-Cl、25mM的pH8.0的EDTA、1％W/V的十二烷基磺酸钠和1.7μg/μL的蛋白酶K。