[发明专利]Nanog抑制型突变体及其在Nanog功能研究中的应用

权利要求书

1.Nanog的核定位信号被突变的核定位序列突变蛋白质，其中核定位信号1和/或核定位信号2被失功能突变，从而影响Nanog蛋白质的核内定位的能力，但是其仍然能与野生型Nanog形成异源二聚体，并且抑制野生型Nanog的转录激活功能。

2.权利要求1中的突变蛋白质，其中所述失功能突变是将核定位序列突变成无关序列。

3.权利要求1或2所述的蛋白质，其中Nanog的核定位信号1如SEQ ID NO：6所示，和/或核定位信号2如SEQ ID NO：7所示。

4.权利要求2所述的蛋白质，其中所述蛋白质中核定位信号1的序列被突变为序列GIONMQ，和/或核定位信号2的序列被突变为序列GMNVDG。

5.权利要求1-4中任一项所述的突变的蛋白质，其中所述Nanog来源于小鼠。

6.编码权利要求1或2所述的突变蛋白质的核酸。

7.如权利要求6所述的核酸，其如SEQ ID NO：8所示。

8.如权利要求6所述的核酸，其如SEQ ID NO：9所示。

9.如权利要求6所述的核酸，其如SEQ ID NO：10所示。

10.如权利要求7-10所述的核酸所编码的蛋白质。

11.获得包含能够表达权利要求1-5中任一项的突变蛋白质的核酸的表达质粒的方法，其中，所述方法包括：

(a)使用适当的表达载体构建野生型Nanog基因的真核表达质粒；

(b)将(a)中构建的质粒进行目的氨基酸的点突变得到突变体；

(c)将(b)中得到的突变体同(a)中得到的野生型基因在细胞内定位上进行比较；

(d)将(b)中得到的突变体同(a)中得到的野生型基因在细胞中的转录激活能力上进行比较；

(e)将(b)中得到的突变体同(a)中得到的野生型基因共同转染，检测(b)中得到的突变体对(a)中得到的野生型基因的细胞内定位的影响；

(f)将(b)中得到的突变体同(a)中得到的野生型基因共同转染，在细胞中检测(b)中得到的突变体存在时，对于(a)中得到的野生型基因的转录激活能力的影响；

(g)选择对于野生型Nanog的细胞内定位以及转录激活能力具有影响的突变体。

12.使用权利要求1-5中任一项的突变蛋白质作为Nanog的抑制型突变体工具抑制Nanog转录激活能力，从而研究Nanog功能的方法。

13.权利要求1-5中任一项的突变蛋白质用于通过抑制Nanog的转录激活能力来研究Nanog在细胞中的功能的用途。

14.使用权利要求6-10中任一项的突变的核酸作为Nanog的抑制型突变体工具抑制Nanog转录激活能力，从而研究Nanog功能的方法。

15.权利要求6-10中任一项的突变的核酸用于通过抑制Nanog的转录激活能力来研究Nanog在细胞中的功能的用途。