[发明专利]一种检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因的生物芯片及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程及医学检验领域，涉及一种检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因 的生物芯片及其制备方法和应用。

背景技术

基因芯片(gene chip)又称DNA芯片或微阵列(microarray)，是生物芯片的一种， 基因芯片技术是近年来出现的分子生物学、分析化学和微电子技术相结合的DNA分析 技术，以其高通量、微型化、多样性和快速自动化等特点，成为临床诊断、基因表达分 析等基因功能分析中得到广泛应用。基因芯片的原理是通过微阵列技术将高密度的DNA 片段通过点样仪以一定的顺序或排列方式使其附加在固相载体表面，将组织或细胞提取 的DNA进行荧光(生物素等)标记，借助碱基互补的原则与芯片杂交，然后利用共聚 焦激光扫描仪系统或其他光学扫描设备进行图像分析，最后用计算机进行数据分析。

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)是寄生于人体胃部的革兰氏阴性杆菌， 1983年Marshall和Warren从慢性活动性胃炎患者胃粘膜活检标本中分离到幽门螺杆菌， 这一发现对胃十二指肠病学的发展起了极大的推动作用。现已证实幽门螺杆菌为慢性胃 炎、消化道溃疡主要病因之一，与胃癌及胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)关系密切。 同时与胃外疾病如冠心病等也密切相关。

幽门螺杆菌是一种菌体细长弯曲呈螺型、S型或海鸥型的细菌，长2.5～4.0μm，宽 0.5～1.0μm，革兰染色阴性。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆 状或圆球状。在电子显微镜下菌体的一端可伸出2～6条鞭毛，运动活泼。幽门螺杆菌为 微需氧菌，在5％O₂、10％CO₂、85％N₂的环境下生长良好，最适生长温度为35℃， 相对湿度为98％，幽门螺杆菌的营养要求较高，一般需含血液或者血清才能生长。幽门 螺杆菌生长缓慢，故需要在培养基中添加两性霉素、多黏菌素、万古霉素来抑制杂菌的 生长。幽门螺杆菌的生化反应不活跃，不能利用糖类。脲酶试验、氧化酶试验、触酶试 验阳性。幽门螺杆菌的基因组较小，约1.67×10⁶bp，DNAG+C百分含量为37mol％，其 全部序列已有报道。

幽门螺杆菌感染率已达全球人口的50％以上，而且发展中国家感染率稍高。中国也 是一个幽门螺杆菌感染率较高的国家，为42％～90％。由于幽门螺杆菌是胃溃疡、十二 指肠球部溃疡和胃癌的主要病因之一，与胃癌及胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤关系密切。 同时与胃外疾病如冠心病等也密切相关，所以，根除幽门螺杆菌不但有利于胃溃疡的治 疗，而且可以降低患胃癌和粘膜相关组织淋巴瘤的风险。幽门螺杆菌根除治疗方案很多， 其中PPI加两种抗生素的三联疗法仍是当前国内外推荐的一线治疗方法，目前临床最常 用的抗生素有咪唑类(甲硝唑、替硝唑)、大环内酯类(克拉霉素、阿奇霉素)、β-内酰胺类 (阿莫西林)和喹诺酮类。大环内酯类抗生素比如克拉霉素在体外有强大的杀菌作用，口 服生物利用度高，对酸稳定。克拉霉素的抗菌机制是药物穿入菌体细胞内，与核糖体紧 密结合，作用于23S rRNA V功能区的多肽转移环，抑制多肽转移酶，影响核糖体的位 移过程，阻止肽链延长，从而抑制细菌的蛋白质合成。因此目前推荐的根除幽门螺杆菌 的一线治疗方案是以克拉霉素为主要抗生素的三联疗法，其根除率与不含克拉霉素的三 联疗法比较，可提高10％～20％。随着抗生素的广泛应用，幽门螺杆菌对这些抗生素耐 药率正在逐年上升，而根治幽门螺杆菌失败的主要原因是由于幽门螺杆菌对抗生素的耐 药性。