[发明专利]一株枯草芽孢杆菌及其在生物饲料添加剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于饲料添加剂领域，涉及一株枯草芽孢杆菌及其在生物饲料添加剂中的应用。 

背景技术

近年来，我国的畜牧业生产得到了飞速的发展，规模化、集约化畜禽饲养场呈急剧上升趋势，但同时也存在一些问题，如畜禽粪便中产生的恶臭味污染环境、抗生素的残留、养殖成本高等，它们严重制约了养殖业的进一步发展。为了解决养殖中存在的这些问题，急需开发出一种新型的饲料添加剂，它既能大大降低动物粪便臭味，又能提高饲料转化率，提高动物的免疫力和抗病力，促进其健康快速生长。根据微生态理论，乳酸菌等有益菌的活菌制剂进入肠道后能促进肠道有益菌生长，抑制有害菌，促进肠道微生态平衡，提高畜禽免疫力和抗病力，提高饲料转化率，降低粪便臭味。 

关于微生物饲料添加剂的定义较多，可以概括为狭义和广义的两种定义。广义上认为：微生物饲料添加剂包括益生素和微生物生长促进剂。益生素又称生菌剂，是由活体微生物制成的生物活性制剂，它可通过动物消化道生物的竞争性排斥作用，抑制有害菌生长，形成优势菌群或者通过增强非特异性免疫功能来预防疾病，从而促进动物生长和提高饲料转化率。微生物生长促进剂是指摄入动物体内参与肠内微生物平衡，具有直接提高动物对饲料的利用率及促进动物生长作用的活性微生物培养物。而较为狭义的微生物饲料添加剂则仅仅将范围局限在可以直接饲喂的活菌制剂上。目前，一些饲料企业都在积极寻找和研究新的绿色环保的微生物饲料添加剂，但市场上的此类添加剂存在抗消化道生理环境能力和抗饲料加工能力差、抑菌效果不够显著、安全性不可靠等缺陷。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一株抗消化道生理环境和抗加工能力强、抑菌除臭性能优良，安全可靠的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)HF-A2。 

本发明的另一目的是提供该枯草芽孢杆菌在制备生物饲料添加剂中的应用。 

本发明的目的可以通过以下措施达到： 

本发明所涉及的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HF-A2是从采自健康乳猪的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠靠近粘膜处的内容物中经分离纯化、产酶能力筛选、抗消化道生理环境筛选、抑菌效果筛选、抗饲料加工试验筛选得到的。按《伯杰细菌鉴定手册》第八版鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，将其命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HF-A2，送交中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为CGMCCNo.3241，保藏日期为2009年8月19日。 

枯草芽孢杆菌HF-A2(CGMCC No.3241)具有以下微生物学特征： 

1、形态学特征 

细胞呈杆状，0.9～1.0×1.7～1.8微米，着色均匀，无荚膜，鞭毛侧生，运动，革兰氏染色阳性。芽孢0.5～0.7×0.8～1.3微米，椭圆到柱状，中生到近中生，无伴胞晶体，芽孢囊不明显膨大。菌落为圆形，不透明，不闪光，随着培养时间增长，菌落变厚变干，边缘不整齐，菌落上有褶皱状凸起，污白色或微带黄色。 

2、常规生理生化性质如下： 

枯草芽孢杆菌HF-A2(CGMCC No.3241)的发酵工艺如下： 

(1)制作摇瓶种子：从菌种保藏斜面上挑取单菌落，接种到种子培养基中，于28～37℃，200rpm培养24～30h，得到枯草芽孢杆菌HF-A2(CGMCC No.3241)摇瓶种子液。 

所述的种子培养基为按下述重量体积比(单位：g/L)配制的混合液：蔗糖：20，硫酸铵：5，麸皮：50，柠檬酸三钠：2.5，K₂HPO₄3H₂O：0.3，MgSO₄·7H₂O：0.5，FeSO₄.7H₂O：0.05，pH7.2～7.4，115℃灭菌30min，备用。 

(2)扩大培养：摇瓶种子液以10％的接种量接种于装有发酵培养基的发酵罐中，装液量为60％，于30～35℃，搅拌速度180～220rpm，通气量为1～3V/V.min，培养24～28h放罐；此时所获得的菌体数量约为6×10⁹cfu/ml，通过显微镜观察，有大量芽胞形成。