[发明专利]一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法

权利要求书

1、一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法，其特征在于：其包括以下步骤：

(1)、木材原料的预处理：将木材原料洗净后削面为1cm～2cm大小，用超声波灭菌器进行灭菌处理，随后投入降解池中，加水浸投，将其润胀，得到预处理木质素纤维素；

(2)、预处理木质纤维素的酶解：在所述预处理木质纤维素中加入高效复合酶，投料比为50:1～45:1(体积比)，常温常压下酶解28～36小时，即获得木质纤维素处理液，其中木质素得以完全降解，纤维素、木质素以及半纤维素呈半分离状态；

(3)、纤维素处理液的纯化：往木质纤维素处理液中加入三氯甲烷，投料比为2:1～1.5:1(体积比)，混合萃取6～8小时，分离后移出三氯甲烷，三氯甲烷层中为木质素，萃取率为90～96％。纤维素处理液中的纤维素得率为89～95％，纯度为85～90％。

2、根据权利要求1所述的一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法，其特征在于：所述高效复合酶为以下各材料的混合物(g/L)：复合酶液800～1000mL，KH₂PO₄ 0.3～0.5g，NH₄Cl 1～1.2g，MnSO₄ 0.5～0.8g，CuSO₄ 0.3～0.5g，软腐菌95～100g，定容至1L。

3、根据权利要求2所述的一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法，其特征在于：所述复合酶的制备：在琼脂培养基中接入单色下皮黑菌(Cerrenaunicolor)、变色栓菌(Trametes versicolor)和黄孢原毛平革菌(Phanerochaetchrysosporium EM-446)，在35℃下培养10～12天，从琼脂表面移出1cm²～2cm²的菌丝体，接种到盛有2000mL营养培养基的5000mL三角瓶中，35℃下培养4天～5天，匀浆，将该培养液转移至盛有50L主培养基的培养器中，振摇，35℃下培养5天～7天，离心后取上清液，即为木质纤维素复合酶，其中木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase，简称LiP)为2500U/L～3000U/L，锰过氧化物酶(Manganese-dependent peroxidase，简称MnP)为800U/L～1200U/L，漆酶(Laccase)为60000U/L～130000U/L。

4、根据权利要求3所述的一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法，其特征在于：所述琼脂培养基为包含以下质量份数的材料混合物(g/L)：NaNO₃ 1.8g/L～2.0g/L，K₂HPO₄ 0.4g/L～0.6g/L，KCl 0.4g/L～0.6g/L，MgSO₄ 0.4g/L～0.6g/L，FeSO₄ 0.008g/L～0.012g/L，琼脂12g/L～18g/L，木质素磺酸钙12g/L～18g/L，青霉素0.001g/L～0.003g/L，调pH至6.5～6.8，定容至1L。

5、根据权利要求3所述的一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法，其特征在于：所述营养培养基为包含以下质量份数的材料混合物(g/L)：葡萄糖8～12g，蛋白胨0.2～0.3g，酵母抽提物0.3～0.5g，KH₂PO₄ 0.8～1.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 0.2～0.3g，MgSO₄·7H₂O 0.5～0.8g，定容至1L。

6、根据权利要求3所述的一种从木材中分离和纯化纤维素的高效复合酶方法，其特征在于：所述主培养基为包含以下质量份数的材料混合物(g/L)：麸皮180～220g，木屑750～850g，蛋白胨0.3～0.5g，酵母抽提物0.5～0.8g，Na₂HPO₄·12H₂O0.2～0.4g，MgSO₄·7H₂O 0.4～0.7g，KH₂PO₄ 0.8～1.2g，定容至1L。