[发明专利]通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔光学异构体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔(Landiolol Hydrochloride)光学异构体的方法，更具体的说是检测盐酸兰地洛尔生产过程中或者是盐酸兰地洛尔产品中盐酸兰地洛尔A异构体(Isomer A)、盐酸兰地洛尔B异构体(Isomer B)及盐酸兰地洛尔C异构体(Isomer C)的方法。

背景技术

盐酸兰地洛尔是在盐酸艾司洛尔基础上进行结构改进而获得的新化合物，其化学名为4-[(2S)-2-羟基-3-[[2-[(4-吗啉甲酰)氨基]乙基]氨基]丙氧基]苯丙酸4-[(4S)-2，2-二甲基-1，3-二氧五环]甲酯盐酸盐，分子式：C₂₅H₃₉N₃0₈·HCl，分子量：546.05，具有选择性β₁受体阻断作用，不具有内在拟交感活性和膜稳定作用。盐酸兰地洛尔作用机制是主要作用于心脏β₁受体，并抑制交感神经末梢及肾上腺髓质释放的去甲肾上腺素和肾上腺素引起的心率增加。很多异构体通过高效液相色谱法分离的方法是已知的，但流动相、溶剂、柱温、色谱柱等因素对于检测结果有很大影响或不适用于目标检测物。

发明内容

本发明的目的是提供通过高效液相色谱法检测在盐酸兰地洛尔手性合成中所得盐酸兰地洛尔A、B、C异构体的方法，以控制合成样品的纯度。

本发明采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为固定相的手性柱进行检测，纤维素酯类结构中的空穴和通道与异构体选择性的形成了异构体包合物，从而达到分离。

流动相对实验结果中盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地洛尔B异构体及盐酸兰地洛尔C异构体分离度及峰形均有很大影响，经发明人实验摸索，确定以正己烷-异丙醇-二乙胺(70～90∶10～30∶0.02～0.5，优选为75～85∶15～25∶0.05～0.2，更优选为80∶20∶0.1)为流动相效果很好。其中加入二乙胺可以改善峰形。

溶剂的选择与盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A、B、C异构体分离度有关。经实验确定采用正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇作为溶解用溶剂，优选以异丙醇∶甲醇(50∶50)为溶剂。

本发明提供的通过高效液相色谱法检测盐酸兰地洛尔A、B、C异构体的方法的具体条件如下：

1.色谱条件：色谱柱采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)为固定相的手性柱；流动相为正己烷-异丙醇-二乙胺(70～90∶10～30∶0.02～0.5，优选为75～85∶15～25∶0.05～0.2，更优选为80∶20∶0.1)；检测波长为200nm～240nm(优选为210nm～230nm，更优选为约220nm)；柱温为20～40℃(优选为30～40℃，更优选为35℃)；流动相流速为0.5～2.0ml/min(优选为0.8～1.2ml/min，更优选为约1.0ml/min)。

2.样品溶液的配置：采用有机溶剂(优选选自正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇，更优选为异丙醇∶甲醇(50∶50))，将样品配制为含盐酸兰地洛尔0.5～5.0mg/ml的溶液(优选1～3mg/ml，更优选为2mg/ml)的溶液。

3.测定：将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并进行分析。

采用此色谱条件测定盐酸兰地洛尔中盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地洛尔B异构体及盐酸兰地洛尔C异构体分离度可达1.5～3.9，符合中国药典要求。此色谱条件同时可用于盐酸兰地洛尔光学异构体的定量。

附图说明

图1：按照实施例1的条件分离盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地洛尔B异构体及盐酸兰地洛尔C异构体的高效液相色谱图。(1)号峰为盐酸兰地洛尔B异构体，(2)号峰为盐酸兰地洛尔A异构体，(3)号峰为盐酸兰地洛尔C异构体，(4)号峰为盐酸兰地洛尔

图2：按照实施例2的条件分离盐酸兰地洛尔、盐酸兰地洛尔A异构体、盐酸兰地洛尔B异构体及盐酸兰地洛尔C异构体的高效液相色谱图。(1)号峰为盐酸兰地洛尔B异构体，(2)号峰为盐酸兰地洛尔A异构体，(3)号峰为盐酸兰地洛尔C异构体，(4)号峰为盐酸兰地洛尔

具体实施方式

实施例1.

仪器：SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，OV-100柱温箱；

色谱柱：Daicel Chralcel OJ-H色谱柱(0.46×25cm，5μm)；