[发明专利]一种老龄秤锤树的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培养组织进行快速繁殖的方法，具体为老龄秤锤树的组织培养方法。

背景技术

秤锤树，英文名：Weighttree，学名：Sinojackia xylocarpa Hu，隶属安息香科秤锤树属，为我国北亚热带东部特有树种。秤锤树枝叶浓密，色泽苍翠，初夏盛开白色小花，洁白可爱，秋季落叶后宿存的悬挂果实，宛如秤锤一样，具有较高的观赏价值。由于秤锤树种子自然状态繁殖极其困难，已被列为国家二级保护濒危树种。国内外学者对该树种开展了一系列的研究工作，如花粉的形态研究、花粉的超低温储藏、植物地理分布、叶片脉序比较、生物学特性与种子繁殖、种子休眠与萌发，扦插、嫁接、组培快繁，以及分子手段探讨其系统学位置等积累了不少资料。在现有繁殖技术中，组织培养的方法已有报道，但报道中研究对象为3-5年生的幼龄秤锤树，采用原有方法对南京中山陵风景区明孝陵60年生的老龄大树开展组织培养研究未能成功。原因是利用原有方法培养时，发现外植体启动培养困难、增殖系数低、不生根等问题，说明原方法进行老龄秤锤树组织培养的主要技术环节有明显缺陷。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种适合老龄秤锤树的组织培养方法，提高培养的成活率。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种老龄秤锤树的组织培养方法，按下列步骤进行：

(1)：外植体的接种

采用经选育的老龄秤锤树腋芽茎段为外植体，经70％酒精消毒50秒，再用添加Tween-20 1-2滴/100毫升的0.1％的升汞溶液消毒10-12分钟，用无菌水冲洗3-5次，作为外植体进行培养；

(2)：芽苗培养

在超净的工作台上，无菌条件下，将外植体接种在经消毒的含有启动培养基的三角瓶中，先将其置于黑暗条件下10-15天后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-2000lx下，每日光照15小时，温度20-25℃、湿度为50％-60％，培养45天，分化长成试管芽苗，

所述的启动培养基由以下重量含量的原料组成：

每升基本培养基含：

玉米素(ZT)1.0-2.0毫克；

6-苄基嘌呤(BA)0.5-2.0毫克；

α-萘乙酸(NAA)0.01-0.2毫克；

(3)：增殖培养

将上述(2)步中长成的芽苗，剪切，转接于经消毒的含有增殖培养基的三角瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产需要达1500-2000瓶进入下一步，

所述的增殖培养基为：

每升基本培养基含：

玉米素(ZT)1.5-2.5毫克；

6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克；

α-萘乙酸(NAA)0.01-0.1毫克；

柠檬酸(Citric acid)50-100毫克；

(4)：壮苗培养

将(3)中培养的试管芽苗，剪切，接种于经消毒的含有壮苗培养基的三角瓶中，进行壮苗培养，35天后进入下一步。

所述的壮苗培养基为：

每升基本培养基含：

玉米素(ZT)0.5-1.0毫克、

6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、

α-萘乙酸(NAA)0.05-0.2毫克

柠檬酸(Citric acid)50-100毫克。

(5)：生根培养

将(4)步中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3-4片叶片，接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的三角瓶中，进行生根培养7-10天。

所述的生根处理产生根原基培养基为：

每升基本培养基含：

α-萘乙酸(NAA)0.3-0.8毫克；

吲哚乙酸(IAA)0.5-1.0毫克；

柠檬酸(Citric acid)100-150毫克；

(6)：移栽

将(5)步生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黄土体积比为泥炭∶黄心土＝1∶1的基质中，浇透水，保持温度25℃左右，相对湿度85％以上，前7天遮光70％，后逐渐见光，20天后生根成活，生根率达90％以上，45天左右，全光照。

上述老龄秤锤树的组织培养方法，所有培养基其pH值均调至5.8左右，所述的基本培养基配方见表1。

表1每升基本培养基中含有物质种类和质量