[发明专利]一种恶性黑素瘤T细胞纳米抗体、其编码序列及应用

说明书

一、技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，特别涉及一种针对恶性黑素瘤T细胞抗原表位多肽Mart1多肽的纳米抗体。

二、背景技术

恶性黑素瘤发病率不高，但是是一种表皮或粘膜的黑素细胞的恶性肿瘤，恶性程度高，且易发生血行及淋巴转移，预后不良。据上海肿瘤医院的资料，本病占皮肤恶性肿瘤的10％，占全部肿瘤的1-2％，近年来有增加趋势。治疗措施：手术切除，放射治疗，化学治疗(用于有转移者)和免疫疗法(如用卡介苗、白介素II、α-干扰素等作为辅助治疗)或综合以上四种方法结合治疗《http://www.biox.cn/content/20050910/37264.htm》。国外近年在临床试用恶性黑素瘤T细胞抗原表位多肽(gp100，Mart1)的疫苗，其效果也还不能最终肯定。纳米抗体技术，是生物医学科学家在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术结合纳米粒子科学的概念，进行的抗体工程革命，而研发的最新和最小的抗体分子，最初由比利时的科学家(Hamers，R)在骆驼血液中发现。普通的抗体蛋白由两条重链与两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，而且不像单链抗体那样互相黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只有普通抗体的1/10，而且化学性质也更加灵活，能与酶的活性部位和细胞膜中镶嵌的标志等特殊的或不暴露的抗原表位结合在一起，因而应用纳米抗体技术研发新颖肿瘤治疗和检测试剂具有广阔的前景。

三、发明内容

技术问题：

本发明的目的是提供一种针对恶性黑素瘤T细胞抗原表位的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列以及该纳米抗体在制备检测和治疗恶性黑素瘤的药物组合物中的应用。

技术方案：本发明的技术解决方案为：即：

在本发明的第一方面，提供了一种恶性黑素瘤T细胞纳米抗体V_HH链，它的互补决定区CDR具有选自下组的CDR的氨基酸序列：

SEQ ID NO：11所示的CDR1，SEQ ID NO：12所示的CDR2，SEQ ID NO：13所示的CDR3；或

SEQ ID NO：14所示的CDR1，SEQ ID NO：15所示的CDR2，SEQ ID NO：16所示的CDR3；或

SEQ ID NO：17所示的CDR1，SEQ ID NO：18所示的CDR2，SEQ ID NO：19所示的CDR3；或

SEQ ID NO：20所示的CDR1，SEQ ID NO：21所示的CDR2，SEQ ID NO：22所示的CDR3；或

SEQ ID NO：23所示的CDR1，SEQ ID NO：24所示的CDR2，SEQ ID NO：25所示的CDR3。

较佳地，所述的恶性黑素瘤T细胞纳米抗体V_HH链具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的氨基酸序列。

在本发明的第二方面，提供了一种恶性黑素瘤T细胞纳米抗体，它针对恶性黑素瘤T细胞抗原表位Mart1多肽GAAGIGILIV，包括两条具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的氨基酸序列的V_HH链。

在本发明的第三方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：本发明所述的恶性黑素瘤T细胞纳米抗体V_HH链或恶性黑素瘤T细胞纳米抗体，较佳地，所述DNA分子具有选自下组的DNA序列：SEQ ID NO：6、7、8、9或10。

在本发明的第四方面，提供了一种表达载体，它含SEQ ID NO：6、7、8、9或10所示的核苷酸序列，还包含与所述核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。

在本发明的第五方面，提供了一种宿主细胞，其含本发明所述的表达载体。

在本发明的第六方面，提供了本所述恶性黑素瘤T细胞纳米抗体用于检测恶性黑素瘤的用途。

本发明的最后一方面，提供了一种检测和治疗恶性黑素瘤的药物组合物，其含有药学上有效量的本发明所述的恶性黑素瘤T细胞纳米抗体以及药学上可接受的载体。

有益效果：

本发明针对恶性黑素瘤特异性的T细胞抗原表位多肽如Mart1多肽-GAAGIGILIV生物素化后，与亲和素磁珠结合，展示多肽的正确空间结构，以此形式的抗原筛选非免疫纳米抗体基因库(骆驼重链抗体噬菌体展示基因库)，而获得了针对恶性黑素瘤特异性的纳米抗体基因，将此基因与表达载体重组，构建了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。

四、附图说明