[发明专利]一种槲寄生多糖及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖，具体地说是涉及一种中药槲寄生多糖Viscum coloratumpolysaccharide(简称VCP)及它的制备方法和用途。

背景技术

槲寄生(Viscum coloratum(Kom.)Nakai)为桑寄生科(Lorantheceae)半寄生常绿小灌木植物，又称冬青，北寄生、柳寄生等。槲寄生在我国为传统中药，应用历史很悠久。其干燥茎枝为中国药典收载的较常用中药“槲寄生”，《神农本草经》中列为上品，有补肝肾、强筋骨、祛风湿、养血安胎和降血压的功能。用于治疗风湿痹痛、腰膝酸软、下肢麻木、胎动不安、先兆流产和高血压等症。

其近缘植物白果槲寄生为欧洲民间药用植物，英、德、法、荷兰比利时等欧洲国家已有数万名癌症患者利用槲寄生水提物治疗乳癌、胃癌及结肠癌等各种肿瘤，且疗效显著。英国一家制药公司已率先开发出白果槲寄生植物提取物(商品名为Iscardo)，其主要成分就是白果槲寄生多糖。

有研究表明槲寄生多糖可以促进小鼠巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1。也有实验证实槲寄生多糖提取物能抑制人肝癌细胞生长[参见吴勇，何承敏等.槲寄生多糖对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的影响.湖北中医杂志，2003，25：1；李霞，丰平等.方剂槲芪散及君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长的的抑制作用.世界华人消化杂志，2006，14：20]。而对槲寄生多糖结构的研究还未有报道。

近年来我们从中药槲寄生中经提取纯化获得了一种多糖(简称VCP)并对其理化性质、化学结构、生物学活性进行了比较广泛的深入研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种槲寄生多糖，它的制备方法及在制备药物中的用途。

本发明的具体的技术方案如下：

一种槲寄生多糖，它由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸构成，分子量为1.1×10⁶～3.4×10⁶Da，端基碳为α-构型，旋光度[α]_D^t＝+134.6°～+167.3°，多糖的基本骨架由1→5糖苷键连接的阿拉伯糖和1→6糖苷键连接的半乳糖构成。所说的槲寄生多糖的结构式见图1。本发明所说的槲寄生多糖中不含蛋白质和核酸。

一种上述槲寄生多糖的制备方法，它由下列步骤组成：

步骤1.制备槲寄生水提取液；

步骤2.将步骤1所得的水提取液浓缩后，用乙醇沉淀，沉淀经洗涤后，冷冻干燥得VCP粗品；

步骤3.将步骤2所得的VCP粗品溶于蒸馏水，去除沉淀后用Sevag液萃取，保留水层，

步骤4.将步骤3所得的水溶液对自来水透析，透析液浓缩后，冷冻干燥得初步纯化的VCP，

步骤5.取步骤4中得到的VCP，充分溶解后，用离子交换柱(DEAE-52)和分子筛柱层析分离纯化得产品。

具体的操作步骤为：

步骤1.称取中药槲寄生粉末，加水，60～90℃水浴提取2～5h，间歇搅拌，纱布滤去残渣，4000～8000rmp离心去沉淀，

步骤2.将步骤1所得的提取液浓缩，加入3～5倍体积乙醇，4℃放置12～24h，离心，沉淀依次以无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥得VCP粗品。

步骤3.将步骤2所得的VCP粗品加蒸馏水充分溶解，离心，去除沉淀，加入1～5倍体积的Sevag液(氯仿∶正丁醇＝3∶1～5∶1)，剧烈振荡，静置分层，除去下层有机溶剂层及中间层，保留水层，反复萃取2～5次，

步骤4.将步骤3所得的水溶液对自来水透析24～48h，透析液浓缩，冷冻干燥得初步纯化的VCP，

步骤5.将步骤4中得到的VCP充分溶解，上已平衡好的离子交换柱(DEAE-52)，先以蒸馏水洗涤，再以0～2mol/LNaCl溶液梯度洗脱，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分。离子交换柱分离所得多糖组分上分子筛柱层析(Sephadex-G100)，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分，冷冻干燥，即得本发明的VCP。

在上述步骤1中，最好是每500克槲寄生加水2500～5000ml提取。

本发明的VCP对Hela细胞和小鼠移植瘤S180有明显的抑制作用，因此本发明的VCP可以应用于制备治疗肿瘤的药物。

附图说明

图1：VCP的重复单元；

图2：VCP的高效液相色谱纯度鉴定图谱；

图3：VCP的单糖组分的薄层层析图谱；

图4：VCP的甲基化分析步骤示意图；