[发明专利]人源化活性煅烧骨及其制备方法

权利要求书

1.一种人源化活性煅烧骨的制备方法，采用去除有机质并经高温煅烧 后的天然动物松质骨颗粒，其特征在于，其主要成分为羟基磷灰石晶体，具 有三维网状多孔结构，粒径为0.1～5mm的颗粒，孔径大小分布在50～600 μm之间；在煅烧骨表面复合有人体细胞合成分泌的细胞外基质所形成的涂 层；具体步骤为：

步骤一、煅烧骨颗粒处理：将去除有机质并经煅烧后的碎骨块，机械粉 碎为粒径0.1～5mm的颗粒，用筛网分选不同大小等级的煅烧骨颗粒；将煅 烧骨颗粒置于牛血清、或胶原蛋白、或多聚赖氨酸、或RGD多肽的任一种溶 液浸泡不少于1小时；再经干燥后灭菌消毒；

步骤二、配制人体细胞培养液：其组分按体积百分比包括：商用最低必 需培养液DMEM 67.5％、商用培养液F1222.5％、胎牛血清5～15％，胰岛素1～ 50ng/ml、氢化可的松10～500ng/ml、腺嘌呤0.02～0.25mM、碱性成纤维 细胞生长因子1～10ng/ml、转铁蛋白1～10μg/ml、维生素C 10～50μg/ml；

步骤三、细胞接种：将干燥的煅烧骨颗粒按不超过4％的重量比加至人体 细胞培养液中静置0.5～2小时后，采用旋转式细胞培养方法进行动态三维培 养，每三天换液，培养6～10天后取出煅烧骨颗粒；所述的人体细胞培养液 中至少含有10⁵个人体细胞/ml；

步骤四、真空干燥：将培养后的煅烧骨颗粒用磷酸盐缓冲液清洗，真空 干燥至重量不变化，经灭菌消毒后，即得到复合有人体细胞合成分泌的细胞 外基质和细胞生长因子的人源化煅烧骨颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一中所述去除 有机质的步骤为：取动物股骨、椎骨的松质骨，去除表面的软组织，机械加 工成粒径1～20mm大小的碎骨块，用纯水清洗；用浓度为0.5～2g/L胰酶溶 液消化24～72h，再用纯水清洗后置于1M的NaOH溶液中超声波处理2小时 以上，每0.5～1小时更换NaOH溶液，纯水清洗至中性；再用10％～30％H₂O₂溶液处理30分钟以上，纯水清洗后干燥。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一中所述煅烧 的步骤为：将去除有机质干燥后的碎骨块放入刚玉坩埚中煅烧，升温至400～ 800℃后恒温煅烧2～5小时，自然降温。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，二次煅烧的工艺为， 升温至800～1200℃后恒温煅烧2～4小时，自然降温。