[发明专利]一种高灌蓝莓工厂化组培快繁的工艺

说明书

技术领域：

本发明属于生物工程技术领域，涉及植物组织培养技术，具体涉及一种高灌蓝莓工厂化组培快繁的工艺流程。

背景技术：

高灌蓝莓(Blueberry)，学名越橘，系多年生灌木，原产北美。一般无法形成种子，大多采用扦插、压条等繁殖方法，但高灌蓝莓对温度、土壤、气候等要求比较严格，多数品种不易繁殖，扦插养护更不容易，而且高灌蓝莓种质资源退化较为严重，扦插繁殖的质量很不理想。组织培养繁殖植物的技术是一种特殊的营养繁殖方式，现在一般称为快速繁殖技术或微繁殖技术。它是在无菌条件下，利用植物体的一部分，包括细菌、组织和器官，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物的方法。该技术比较成熟，设备比较简单，技术要求不十分高，而经济效益可观，越来越受到人们的重视。因此，采用工厂化生产方式繁育高灌蓝莓品种既能防止品种退化，保证种苗质量，又能提供大量优质廉价的种苗。现有技术一般不针对蓝莓的品种统一用单一培养基，导致出苗诱导率不高；而且诱导时间较长，生根难度大，成活率低，不能适应更加快速的市场需求。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能降低污染率，提高生根成活率且诱导率更高的高灌蓝莓组织培养快速繁殖方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案。

高灌蓝莓组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：

(1)、外植体材料处理：即选用外植体材料进行处理，在杀死率和污染率最低的平衡点制备出符合要求的外植体；

(2)、诱导：即将步骤S1中所述的外植体接种到培养基上，在诱导条件下诱导出芽；所述培养基为琼脂综合培养基的改良；

(3)继代培养：即将步骤S2中所得丛生芽新梢在继代培养基中增殖培养；

进一步的，步骤S1采用当年生剪去叶片的嫩茎，自来水冲洗干净，放入加入活性炭的0.1％氯化汞消毒液中8-30分钟，在无菌工作台上用无菌水冲洗3-5遍，切下解刨芽接种。

优选的技术方案中，所述步骤S1外植体材料处理包括清洗、消毒、和裁剪；所述清洗将用于制作外植体的外植体材料洗净；所述消毒对洗净的外植体材料作消毒处理；所述剪裁将消毒后的外植体材料裁成合适大小的外植体。

步骤(2)中所述培养基的配方为琼脂综合培养基+玉米素0.8--1.3mg/L+萘乙酸0.2---1.6mg/L，将外植体接种在诱导培养基上，1周后开始萌发，40-52天后芽长成4～5cm左右的新梢，侧芽同时也萌发出5～10个丛生芽。

步骤(3)中所述培养基配方为琼脂综合培养基+玉米素1.0mg/L+吲哚丁酸0.2-0.6mg/L将丛生芽切割2cm左右茎段新梢，转入继代培养基上增值培养，后可分化出30～50个丛生芽，一般54-62天继代培养一次，增值率在30～50倍。

所述外植体材料为高灌蓝莓当年生去叶嫩茎。

所述清洗包括无菌水清洗和含洗洁精的水浸洗。

所述消毒包括酒精消毒和加入活性炭的氯化汞消毒液消毒。

采用本发明技术方案的高灌蓝莓组织培养快速繁殖方法，与现有技术对比的有益效果在于：

使用的消毒液对越桔茎段灭菌时，以25min为宜，污染率与杀死率降到最低，成活率最高可达75％。

初代培养50d左右，部分茎段可直接诱导产生萌生芽，在附加玉米素1.0mg/L和萘乙酸1.0mg/L的改良琼脂综合培养基中，诱导时间更短，不定芽的萌芽率最高，达到86.67％；

越桔在改良生根培养基中，生根率达80％以上，其成活率可达95％

由于外植体材料处理包括清洗、消毒和裁剪，能够获得更加优质的外植体，为组织培养快速繁殖方法鉴定良好的基础。

由于优选蓝莓去叶嫩茎作为外植体材料，为组织培养快速繁殖提供良好的的材料保证。

由于清洗包括自来水冲洗和含洗洁精的水浸洗，可以使得清洗更加彻底。

由于消毒包括酒精消毒和加入活性炭的消毒液消毒，消毒更加彻底。

由于将外植体材料去掉叶之后切成0.5～1cm×0.85～1cm大小的嫩茎作为外植体，诱导培养更加方便，且效果更好。

具体实施方式：

下面结合具体实例对本发明的实施做进一步的说明：

实施例1：

1、外植体材料处理：包括对外植体材料进行清洗、消毒和裁剪等处理，以制备出合乎要求的外植体。