[发明专利]检测细菌毒素的纳米增效糖基功能化分子印迹膜电极的制备方法及应用

权利要求书

1.一种检测细菌毒素的纳米增效糖基功能化分子印迹膜电极的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1) 选择能与细菌毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的功能单体；

(2) 将细菌毒素的模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀，制成糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物溶液；

(3) 选取纳米材料，按照现有方法制备出纳米材料溶液；

(4) 利用电极表面修饰技术，将纳米材料和糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物修饰到传感器电极表面上；

所述功能单体为Α-D-吡喃糖基甘露糖、N-乙酰糖胺、N-乙酰乳糖胺、唾液酸神经节苷脂或神经酰胺三已糖苷； 

所述细菌毒素的模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.1～2∶2.5∶0.1～5∶40～80∶0.01～0.10∶1.0～15。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、杂环化合物酰胺或砜类；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述纳米材料溶液为碳纳米管溶液、纳米金溶液或纳米铂溶液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述将纳米材料和糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物修饰到传感器电极表面包括以下步骤：

(1) 将工作电极表面用0.05 μm的氧化铝粉打磨，超声波清洗，再依次用1 mol/L HNO₃，1 mol/L NaOH清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干；

(2) 将制备的纳米材料溶液超声处理20-60min，得到分散的纳米溶液； 

(3) 将工作电极表面浸泡于分散的纳米溶液中5-10分钟，取出晾干；

(4) 将步骤(3)中晾干的工作电极再浸泡于糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物溶液中5-10分钟，然后取出用洗脱剂洗脱20-30分钟，直至去除表面的模板分子，再于室温下干燥5-10分钟；

 (5) 重复步骤(3)和步骤(4)过程4-7次，制得所述糖基功能化分子印迹膜电极。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于还包括以下步骤：将制得的糖基功能化分子印迹膜电极浸入pH6.8-7.5缓冲液中，保存在4℃冰箱，12~24h后取出，用去离子水彻底清洗。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸；所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。

7.一种检测痕量细菌毒素的方法，其特征在于包括以下步骤：将按权利要求1~6任意一种方法制得的糖基功能化分子印迹膜电极连接到电化学工作站，对环境样品提取液中的细菌毒素进行检测。