[发明专利]生产动物专用抗生素阿维拉霉素的菌株及方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物及其发酵生产化合物的领域，属于生物制药技术领域，具体涉及一种生产动物专用抗生素阿维拉霉素的菌株及方法。

背景技术

现代畜牧业的集约化、高密度养殖方式带来了生产效率的提高，同时也大大增加了动物疫病传播的风险。抗生素作为饲料添加剂，不仅可以促进动物生长，更重要的是预防病原菌感染、群体疾病的发生，对集约化饲养业的发展做出了重大贡献，极大地提高了饲养业的经济效益。但同时，也产生了有关耐药菌株、药物残留等问题。由于我国动物专用抗生素品种少，大量人用抗生素同时用于动物疫病治疗和促生长，并且使用方法不科学，导致一方面由于药物残留，动物产品出口遇阻，另一方面，出现了越来越严重的细菌耐药性的问题。为了防止耐药菌的产生对人类健康造成威胁，世界各国的科学家对抗药性的产生机制做了长期的研究，研究结果认为，逐步减少和限制人用抗生素在动物中的使用，发展动物专用抗生素是未来畜牧业的发展趋势。动物专用抗生素，是指专用于动物疾病的预防治疗和促生长，在人类临床上没有应用，不与人用抗生素结构类似，不与人用抗生素产生交叉耐药性的抗生素。

阿维拉霉素(Avilamycin)又名卑霉素，属寡糖类抗生素，是一种使用效果卓越的动物专用抗生素。阿维拉霉素约有A、B、C、D、F、G、H等十二种成分，其中最具活性的是阿维拉霉素A组分，阿维拉霉素具有较高的安全性，在肠道中不吸收，在畜产品中无残留；排泄后(包括分解物)对环境安全；在配合饲料的制作中，很少产生粉尘等污染；在畜禽饲料中添加使用时，无需停药期。由于卓越的使用效果，阿维拉霉素已在世界40多个国家广泛使用。

阿维拉霉素的生产方法主要采用发酵结合后处理工艺。目前，我国尚没有实现阿维拉霉素的工业化生产，主要由于菌种产素能力较低，发酵工艺关键控制点较多，发酵周期长，组分比例难以控制，生产成本高昂。

发明内容

为解决上述存在的问题，本发明提供了一种生产动物专用抗生素阿维拉霉素的菌株。

本发明还提供了利用上述菌株生产阿维拉霉素的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

所述的生产动物专用抗生素阿维拉霉素的菌株为绿色产色链霉菌(Streptomycesviridochromogenes) SDSL1119，已于2009年7月21日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.3198。该菌种适应在较高糖浓度下用于阿维拉霉素发酵。

所述的生产阿维拉霉素的方法包括绿色产色链霉菌Streptomycesviridochromogenes SDSL1119的斜面菌种培养、摇瓶菌种培养、发酵培养等步骤。通过优化发酵工艺，解决了阿维拉霉素发酵单位低、组分比例失调、生产成本高等问题。

一、菌株选育

第一阶段

从野生菌Streptomyces viridochromogenes SDSL1号菌出发，经连续紫外诱变得到比出发菌株产量提高161％的104号高产菌株。该菌株经过连续的紫外诱变之后，适应在较高的糖浓度下用于发酵生产阿维拉霉素，克服了野生菌株不适应高糖培养基的缺陷。较高的糖浓度有利于阿维拉霉素的细胞内合成。

第二阶段

将104号高产菌株经连续的链霉素抗性筛选，得到较104菌株产量提高102％的232菌株。

平板筛选培养基组成为：玉米淀粉20～25g/L，KNO₃ 1～2g/L，K₂HPO₄ 0.5～1g/L，MgSO₄·7H₂O0.5～0.8g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.02g/L，NaCl 0.5～1g/L，琼脂20～40g/L，培养基pH 7.0～7.2，将链霉素按照30～200ug/ml的浓度添加至培养基中，制作成平板，121℃灭菌30分钟。利用该链霉素抗性筛选平板，筛选抗链霉素的菌株，培养温度27～30℃，培养时间8～11天。

第三阶段

将232菌株经多轮亚硝基胍诱变，结合链霉素抗性筛选得到SDSL1009菌株，较232菌株产量提高56％。

第四阶段

SDSL1009菌株经多轮自然分纯，链霉素抗性筛选得到SDSL1119菌株，产量达到5000U/ml以上。

二、发酵过程