[发明专利]一种由褐藻中提取岩藻黄素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从褐藻中提取岩藻黄素的方法

背景技术

褐藻门(Phaeophyta)约有250属1500种，除少数属种生活于淡水中外，绝大部分为海产。褐藻中经济海藻多，经济价值大。其中，海带、裙带菜、羊栖菜等均可食用和药用。岩藻黄素(fucoxanthin)亦称褐藻素或岩藻黄质，分子式为C₄₂H₅₈O₆，为褐藻、硅藻、金藻及黄绿藻所含有的一种重要的类胡萝卜素，具有抗肥胖、抗肿瘤、调节血糖含量、抗血管新生、抗氧化和清除自由基、抑制脂多糖诱导炎症、抑制哺乳动物的DNA复制酶等活性，还可作为食品添加剂用于水产业和喂养家禽，起到加强动物的疾病抵抗力、为蛋黄增色等作用。岩藻黄素广泛分布在褐藻类植物中。

我国褐藻资源丰富，褐藻加工业繁盛，而存在于褐藻类植物中的岩藻黄素是一种健康食品补充剂、添加剂和有效的防癌药物，所以对岩藻黄素的提取分离和开发利用显得迫在眉睫。

国际上，日本在岩藻黄素的研究上处于领先。国内则显得相对匮乏，中国科学院海洋研究所曾就海藻中分离岩藻黄素的方法于04年6月申请专利。该专利涉及岩藻黄素的提取分离，具体操作过程为，将新鲜海藻或冰冻海藻于室温下解冻后，用蒸馏水清洗去除表面盐离子，然后除去其表面水分，再将海藻用二甲基亚砜在黑暗中浸提，浸提时间为15-60分钟，二甲基亚砜的用量为2-6ml/每克海藻，最后用乙酸乙酯和硫酸氨混合溶液将二甲基亚砜浸提液中的色素萃取到乙酸乙酯中。上述提取方法存在以下缺陷：(1)所提岩藻黄素的得率、纯度较低。(2)所用化学试剂二甲基亚砜可能会造成人体恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味；高挥发浓度的二甲基亚砜被人体吸入可能导致头痛和晕眩；能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感；二甲基亚砜还可能会渗入肌肤，在一定条件下会将有毒物质代入肌肤。(3)所用化学试剂硫酸铵对眼睛、粘膜和皮肤有刺激作用。受热分解会产生有毒的烟气；有害燃烧产物为氮氧化物、硫化物。(4)其分离纯化岩藻黄素所采用的硅胶柱层析方法步骤繁琐，费时费力。

目前国内市场已出现销售纯度极低的工业岩藻黄素，5％岩藻黄素价格在每公斤300-450美元之间。岩藻黄素标准品目前已知仅有日本西宝生物公司销售，4μg岩藻黄素衍生物标准品溶于2.5ml乙醇溶液，售价为7080人民币。

发明内容

本发明的目的是提供一种由褐藻中提取岩藻黄素的方法，它能克服现有技术的上述缺点，能快速有效的从褐藻中提取岩藻黄素。

本发明的技术方法，其特征是将新鲜的褐藻打浆，加入有机试剂，再加入质量千分数为0.5-1的抗氧化剂，浸提22-26小时后抽滤，得到浸提液，反复浸提直至有机层无色，合并各次有机层液体于棕褐色瓶中；旋转蒸发除去有机溶剂，向旋转蒸发器皿中所得贴壁物中加体积比1∶1-2的乙酸乙酯和水，溶解后振荡分层，收集有机层，反复3-6次，合并各有机层液体后旋转蒸发浓缩，得该褐藻的总色素；利用硅胶柱层析分离纯化，得高纯度岩藻黄素。

本发明制得的岩藻黄素纯度高，操作简单易行，便于工业生产，针对国内外高纯度岩藻黄素的市场空缺，为进一步开发相关工业化产品和医药保健品提供了基础条件。

附图说明

图1高纯度岩藻黄素的高效液相色谱图。

图2高纯度岩藻黄素的紫外/可见光吸收图谱(溶剂为乙酸乙酯)。

图3高纯度岩藻黄素的电喷雾质谱图。

图4高纯度岩藻黄素的¹H核磁光谱图。

图5高纯度岩藻黄素的¹³C核磁光谱图。

具体实施方式

将1kg裙带菜吸干水，剪碎放入搅拌机中加水搅拌成浆状，倒入棕褐色瓶中，每天加入500ml丙酮试剂，再加入1g的MgCO3粉末防止氧化，避光低温浸提，静置24小时，然后用布氏漏斗抽滤出丙酮浸提液，反复浸提12天次，直至丙酮层无色。合并各次丙酮浸提液于棕褐色瓶中，旋转蒸发除去丙酮，再向旋转蒸发器皿中加入乙酸乙酯溶解贴壁物，移入分液漏斗中后再加入与乙酸乙酯同体积的蒸馏水振荡分层，取乙酸乙酯层，反复3次，合并各乙酸乙酯层旋转蒸发浓缩，得裙带菜总色素。将浓缩后的含有岩藻黄素的乙酸乙酯提取液用硅胶柱层析(5cm×80cm)。以体积比为1∶0.43-9的石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱，最后用1L乙酸乙酯冲柱。用体积比为1∶1的石油醚∶乙酸乙酯洗脱时出现的橘黄色液体为岩藻黄素。1kg裙带菜中制得岩藻黄素0.27g，所得岩藻黄素的纯度近90％。

本发明中所述的褐藻为海带、鹿角菜、马尾藻、海蒿子、昆布、裙带菜、羊栖菜或铁钉菜；所述的浸提为低温避光浸提；所述的有机试剂为丙酮、70-100％的乙醇溶液或甲醇；所述的浸提过程中加入质量千分数为0.5-1的抗氧化剂为MgCO3粉末或维生素C；所述的一种由褐藻中提取岩藻黄素的方法，其特征是所述的硅胶柱层析是用体积比1∶0.33-0.43→1∶7.3-9的石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱；所述的高纯度岩藻黄素纯度为88％以上。