[发明专利]一株绿色木霉工程菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程及生物防治技术领域；具体地说，本发明涉及一株过表达内切几丁质酶基因的工程菌株绿色木霉工程菌，还涉及该菌株在蔬菜生物防治中的应用。

背景技术

木霉(Trichoderma spp.)属于半知菌亚门，丝孢纲，丛孢梗目，丛孢梗科，是一类分布广泛的土壤习居菌，常见于植物残体及动物粪便上。除个别为弱病原菌外，大多数对植物病原菌具有拮抗作用。由于木霉具有广泛适应性、产拮抗物的多样性和寄生广谱性，因而作为植物病害生物防治的拮抗菌被广泛研究。

木霉菌对植物病原菌的生防作用机制包括竞争作用、重寄生作用和抗生作用等。木霉菌的重寄生作用是其拮抗病原真菌的主要机制，它包含了对病原菌的侵袭、识别、接触、缠绕、穿透和寄生等一系列连续步骤的复杂过程(Elad Y，Barak R，Chet I.Parasitismof Sclerotium rolfsii by Trichoderma harzianum[J].Soil Biol Biochem，1984，16：381-386)。研究表明，木霉菌和寄主真菌识别后，木霉菌丝沿寄主菌丝平行生长和螺旋状缠绕生长，并产生附着胞状分枝吸附在寄主菌丝上，通过分泌胞外酶溶解细胞壁，穿透寄主菌丝，吸取营养(Elad Y，Chet I，Boyle P，et al.Parasitism of Trichoderma spp.on Rhizoctoniasolani and Sclerotium rolfsii scanning electron microscopy and fiuorescence microscopy[J].Phytopathology，1983，73：85-88)。多数学者认为拮抗木霉菌在寄生过程中产生了一系列降解病原菌细胞壁的水解酶，如几丁质酶、纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和蛋白酶等。研究表明，与拮抗木霉菌的生防作用有关的胞外酶主要是几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶(Lorito M，Hannan GE，Hayes CK，et al.Chitinolytic enzymes produced by Trichodermaharzianum：antifungal activity of purified endochitinase and chitobinase[J].Phytopathology，1993，83：302-307；Sela-Buurlage MB，Ponstein AS et al.Only specific tobacco-chitinase andβ-1，3-glucanase exhibit antifungal activity[J].Plant Physiology，1993，101：857-863)。

绿色木霉(Trichoderma viride)是一类重要的木霉菌，具有分布广泛、生长快速和持效期长等特点，已经被广泛地应用于植物土传病害的生物防治(Howell C R.Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases：The history and evolution of current concepts[J].Plant Disease，2002，87，(1)：4-10)。但是，目前所使用的绿色木霉生防制剂仍存在进一步提高生防作用的有效性和稳定性的问题。随着基因工程技术的日趋完善，克隆转化拮抗病原真菌的基因到木霉菌中构建具有高拮抗效能的工程菌株已成为生防工作的重点。由于几丁质酶在生防机制中起到重要作用，其相关编码基因在生防工程菌改造方面受到广泛关注。然而，目前国内还未见通过过表达内切几丁质酶基因构建高效绿色木霉工程菌的工作。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一株过表达内切几丁质酶的绿色木霉工程菌以及该菌株在蔬菜生物防治中的应用。利用本工程菌株的孢子液制剂可以有效的提高黄瓜、番茄等蔬菜对真菌病害的抵抗力，并同时提高蔬菜产量。

本发明所述绿色木霉工程菌，含有过表达内切几丁质酶基因，该菌命名为绿色木霉(Trichoderma viride)R65(ech42)，并已于2008月12日29日保藏于“中国典型培养物保藏中心”，保藏号为CCTCC N0：M 208265。