[发明专利]一种新型PRRS病毒受体及该受体的阻断抑制剂

说明书

技术领域

本发明涉及发现一个新型PRRS病毒细胞受体以及利用受体蛋白和多肽及其衍生物进行对PRRS病毒感染的防治，属于生物学领域。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)又名蓝耳病，是由PRRS病毒(PRRSV)感染所致的一种猪的急性传染病。PRRSV侵入宿主细胞首先通过与细胞膜表面上的特异性受体结合。利用细胞内吞作用而感染易感细胞(Nauwynck，HJ，Duan X，Favoreel HW，etc.J.Gen.Virol.1999，80：297-305)，如MA-104和PAM。到目前为止已报道的四个独立但功能相关的PRRSV细胞受体，它们是唾液酸粘附素(Sialoadhes in)(Vanderheijden N，Delputte PL，Favoreel HW，etc.J.Virol.2003，77：8207-8215)，似肝磷脂蛋白(Heparinlike)(Delputte PL，Vanderheijden N，Nauwynck，HJ，etc.J.Virol.2002，76：4312-4321)，波形蛋白(Vimentin)(Kim JK，Fahad AM，Shanmukhappa K，etc.J.Virol.2006，80：689-696)，清道夫受体(CD163)蛋白(Calvert JG，Slade DE，Shields SL，etc.J.Virol.2007.81：7371-7379)。但是还存在有其他的PRRSV细胞受体，这些受体均可结合或参与结合PRRSV感染易感细胞，从而引起蓝耳病。因此，通过对PRRSV的研究，依然会不断的有新的病毒受体出现，从而扩大研究的范围。

发明内容

本发明涉及一个新型PRRSV的细胞受体，同时提供了一种利用纯化的NMHCII-A蛋白和人工合成的多肽及其blebbistatin作为受体阻断剂，抑制PRRSV感染细胞的方法，同时可以作为受体阻断剂的还有利用NMHC II-A蛋白和多肽免疫小鼠所得的抗体。上述的各种阻断剂都对PRRSV感染细胞有抑制活性，可开发成防治PRRSV感染的药物。

申请人利用模拟PRRSV的GP5膜抗原的单克隆抗独特型抗体首先从非洲绿猴肾细胞系(MA-104)和猪肺巨噬细胞(PAM)上分离和提纯出一个可溶性蛋白(Zhou EM，Xiao YH，Shi YF，etc.J.Virol.Methods.2008，149：300-308)。

利用这个模拟PRRSV GP5抗原的单克隆抗独特性抗体，申请人发现了一个新的PRRSV细胞受体，经过分析其氨基酸序列所得该受体为即非肌肉肌球蛋白II型重连A(nonmuscle myosin heavy chain II-A，NMHC II-A)蛋白，其蛋白的羧基端的氨基酸序列为Seq ID No：1所示。

同时发现了该受体阻断和抑制剂，它们是NMHC II-A蛋白、NMHC II-A多肽、抗NMHC II-A蛋白和多肽抗体，以及非肌肉肌球蛋白II型(nonmuscle myosinII，NMM-II)抑制剂，即(+)-blebbistatin：是NMM-II的选择性抑制剂[(±)-或(-)-blebbistatin]的无活性的对映异构体。其中：

(a)NMHC II-A蛋白，蛋白的羧基端的氨基酸序列为Seq ID No：1所示；

(b)NMHC II-A人工多肽，其氨基酸序列为Seq ID No：2所示；

(c)NMHC II-A人工多肽，其氨基酸序列为Seq ID No：3所示；

(d)NMHC II-A人工多肽，其氨基酸序列为Seq ID No：4所示；

上述病毒受体及受体阻断和抑制剂，所针对的PRRSV主要包括经典美洲株(代表毒株为VR-2332)，中国分离株(代表毒株为Ch-1a)，以及高致病性毒株(代表毒株为JXA-1)。