[发明专利]一种5-α还原酶抑制剂-荨麻裂环木脂素苷B及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药生物活性成分的提取制备方法，具体涉及一种5-α还原酶抑制剂-荨麻裂环木脂素苷B及其制备方法。

背景技术

荨麻属植物中含有大量的木脂素类成分，从中鉴定出了13个木脂素类化合物：(+)-新橄榄树脂素、(-)-开环异落叶松脂素、异落叶松脂素、松醋醇、3，4-二香草基四氢吠喃、新橄榄树脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、9-乙酰基-新橄榄树脂素、9-乙酰基-新橄榄树脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、9，9’-二乙酰基-新橄榄树脂素、9，9’-二乙酰基-新橄揽树脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、(-)-开环异落叶松脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷、(-)-开环异落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、新橄榄树脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷。其结构类型主要有新橄榄树脂素及其苷类和开环落叶松脂素、落叶松脂素及其苷类，其中新橄榄树脂素及其苷类结构如下：

新橄榄树脂素                            新橄榄树脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷

新橄榄树脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷                9-乙酰基-新橄榄树脂素

9，9`-二乙酰基-新橄榄树脂素、9-乙酰基-新橄榄树脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷

9，9`-二乙酰基一新橄揽树脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷           橄榄脂素

开环落叶松脂素、落叶松脂素及其苷类结构如下：

(-)-开环异落叶松脂素                 (-)-开环异落叶松脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷

(一)-开环异落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷         5-甲氧基开环异落叶松脂素

异落叶松脂素

有研究表明从大荨麻根中分离到(+)-新橄榄树脂素、(-)-开环异落叶松脂素、脱氢二松柏醇、异落叶松脂素、松脂醇和3，4-二香草基四氢呋喃，并检验了以上几种物质体外与SBHG的亲和作用，结果除松脂醇外，其余化合物都有亲合力，其中3，4-二香草基四氢呋喃的亲合作用最强，浓度为250μg/ml时抑制率为95％。提示大荨麻根中木脂素类是治疗BPH的活性成分之一。

本课题组曾对国产的8种荨麻属植物根的不同提取物进行了抗前列腺增生的生物活性筛选，结果表明滇藏荨麻根的20％和95％乙醇提取物能显著地抑制前列腺增生大鼠的病变组织。

发明内容

本发明的目的是在前期研究的基础上，为了进一步研究提取物抗前列腺增生的活性部位和作用机理，选取前列腺组织中一个关键酶-5α-还原酶为作用靶点，采用酶联免疫(Enzyme-linked immunospecific assay ELISA)的方法，建立抑制5α-还原酶体外模型，从大鼠前列腺组织中提取5α-还原酶，与底物睾酮以及供氢体NADPH共同组成了一种微量反应体系，利用酶标仪检测双氢睾酮(DHT)的含量，以DHT的含量来判断荨麻提取物是否有抑制5α-还原酶的活性。

本发明从三角叶荨麻中分离得到了荨麻裂环木脂素苷B，该成分的结构不同于上述木脂素类成分，为一种新的裂环木脂素类成分，对抑制5α-还原酶作用研究发现具有较强活性，是一种潜在的抗前列腺增生药物成分。

本发明的技术方案是：一种5-α还原酶抑制剂-荨麻裂环木脂素苷B，其分子结构式如下：

上述5-α还原酶抑制剂-荨麻裂环木脂素苷B的制备方法是以三角叶荨麻为原料，制备步骤如下：

(1)将三角叶荨麻干燥地下部分粉碎处理后，用质量浓度为95％的工业乙醇回流提取，过滤后减压浓缩；

(2)将醇提取物用50-90℃的水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，各萃取三次；

(3)正丁醇萃取物经大孔树脂D101分离，采用质量浓度为30％的乙醇洗脱，收集洗脱液；

(4)乙醇洗脱液用硅胶柱色谱分离纯化，采用体积比为氯仿∶甲醇＝30∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1的梯度洗脱，收集洗脱液；

(5)步骤(4)的洗脱液经反相硅胶柱色谱分离纯化，采用体积比为甲醇∶水＝3∶7的溶液洗脱，每15-30ml收集成1份，收集第25-30份洗脱液，合并浓缩后得到荨麻裂环木脂素苷B。

采用核磁共振(NMR)等波谱技术测定其结构，荨麻裂环木脂素苷B的波谱数据见表1。