[发明专利]芫花中新的瑞香烷型二萜类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及芫花中新的瑞香烷型二萜类化合物及其制备方法，本发明还涉及该类新化合物在抗肿瘤生物活性方面的用途。 

背景技术

瑞香科植物芫花(Daphne genkwa sieb.et Zucc)为传统的泻下逐水药。目前对其抗肿瘤、引产、镇咳祛痰、杀虫、抗炎、免疫功能调节等方面研究较多。国内外学者从瑞香科植物芫花的花及花蕾、根、中分离得到了一系列具有特殊结构的瑞香烷型二萜原酸酯类化合物。瑞香烷型二萜又名瑞香毒素类化合物(Daphnetoxin)具有很强的生物活性，20世纪70年代初，人们从瑞香属植物中分离出具有抗肿瘤活性的欧亚瑞香素(Mezerein)和瑞香毒素(Daphnotoxin)后，该类化合物便成为一个研究热点，由于瑞香烷型二萜具有独特的抗肿瘤生理活性而受到重视。 

现代医学研究表明癌症是一种特别严重的癌毒扩散症，癌毒的形成是目前的生活方式的产物，并有越来越严重的的趋势。因此寻找更加有效的抗癌、抗肿瘤药物刻不容缓。 

发明内容：

本发明的目的旨在从中药芫花中寻找新的抗肿瘤前体药物，提供该类瑞香烷型二萜类化合物的提取、制备方法，并且研究它们的抗肿瘤生物活性和医药用途。本发明的另一个目的在于提供该类化合物的结构鉴定方法。 

(一)本发明所述一系列6个新的瑞香烷型二萜类化合物(Genkwanine II，Genkwanin III，GenkwaninIV，Genkwanin V，GenkwaninVI，GenkwaninVII)的结构式如下： 

(二)本发明所述新的瑞香烷型二萜类化合物(Genkwanine II，GenkwaninIII，GenkwaninIV，Genkwanin V，GenkwaninVI，GenkwaninVII)的提取、制备方法如下： 

选用瑞香科植物芫花(Daphne genkwa.et zucc)的干燥花蕾4000～6000g为原料，5～8倍量的体积比为60％～95％工业乙醇室温下冷浸提取15～20天，每24～48h小时减压浓缩一次，累计总浸膏500～600g，总浸膏用3～5L水混悬后，分别用氯仿，正丁醇以1∶1的体积比进行萃取，萃取3～5次，得到的氯仿层干浸膏200～300g，正丁醇层干浸膏200～300g，及浓缩后水液10～15L； 

氯仿层浸膏进行快速减压柱色谱或常压柱色谱分离，沸程为30～60℃，或60～90℃的石油醚-丙酮50∶1～2∶1(V/V)混合溶剂梯度洗脱，每300～500ml体积为一馏分，共收集到40～50个馏分，经硅胶薄层层析检识，合并得到F1～F6的6个馏分， 

馏分F4经氯仿-甲醇100∶0～2∶1混合溶剂梯度洗脱，得到F4-1～F4-6的6个馏分，F4-4分别经MCI gel柱色谱甲醇-水系统梯度洗脱除去叶绿素，硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇系统洗脱分离，C₁₈反相硅胶柱色谱以及制备高效液相色谱甲醇-水系统梯度洗脱分离，旋转蒸发仪回收溶剂得到白色粉 末或透明状物质，化合物GenkwaninVI和GenkwaninVII； 

馏分F6经氯仿-甲醇80∶0～2∶1或二氯甲烷-甲醇80∶0～2∶1混合溶剂梯度洗脱，得到F6-1～F6-4的4个馏分，F6-2分别经MCI gel柱色谱甲醇-水系统梯度洗脱除去叶绿素，硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇系统洗脱分离，C₁₈反相硅胶柱色谱以及制备高效液相色谱甲醇-水系统梯度洗脱分离，旋转蒸发仪回收溶剂得到白色粉末或透明状物质，化合物Genkwanin II，GenkwaninIII，GenkwaninIV，Genkwanin V。 

根据如上所述的提取及萃取方法得到的氯仿层干浸膏经石油醚-丙酮系统50∶1～2∶1(V/V)混合溶剂梯度洗脱硅胶柱层析后得到馏分F 1-F6。 

馏分F3经石油醚-丙酮80∶0～2∶1或二氯甲烷-甲醇100∶0～2∶1混合溶剂梯度洗脱，得到F3-1～F3-7的7个馏分，馏分F3-3经MCI gel柱色谱以甲醇-水或乙醇-水系统梯度洗脱，收集20～50％洗脱的馏分，经C₁₈反相硅胶柱色谱以甲醇-水系统梯度洗脱，收集50～80％洗脱的馏分，经反相制备高效液相色谱分离，采用甲醇-水系统梯度洗脱，回收溶剂后，共得到化合物Genkwanin II，GenkwaninIV，Genkwanin V。