[发明专利]江蓠多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种江蓠多糖的制备方法。 

背景技术

江蓠是多年生的大型红藻，属于红藻门，真红藻纲，杉藻目，江蓠科，江蓠属，世界江蓠藻种类已报道的约有100种，我国常见的江蓠藻主要有10多种。江蓠藻是我国海南、广东、浙江、台湾沿海藻类养殖品种之一，主要作为渔业养殖饲料和生产食品胶原料，对其进行多糖提取分析的研究报道很少。我们经过江蓠藻多糖提取工艺的不断摸索以及结合以往的一些经验，发明了江蓠藻多糖。 

江蓠多糖是江蓠藻中的重要生物活性成分之一，多糖是组成生物有机体的一类是组成生物有机体的一类重要生物大分子，作为信息分子广泛参与细胞间配体与受体的相互识别、细胞内信号转导等生理过程，与细胞活化、增殖、分化及产生细胞因子等有关。随着天然药物研究的不断深入，人们发现海藻多糖具有抗感染、抗肿瘤、抗凝血、抗辐射、清除氧自由基和延缓衰老的作用。 

发明内容

本发明的目的是提供一种江蓠多糖的制备方法，简单、安全、环保、低成本。 

为达到上述目的，本发明所提供的技术方案是：一种江蓠多糖的制备方法，包括以下步骤： 

(1)、将采集的江蓠藻冲洗干净，弃去杂藻和污物，50℃～100℃烘干、粉碎成藻粉；藻粉加入5倍量以上的水进行加热提取，60℃以上提取30分钟以上，降至室温，过滤，得滤液①； 

(2)、在滤液中按每公斤江蓠藻粉加入10～20万国际单位比活力的裂解酶进行酶解，pH值为6.0～9.0，酶解温度为30℃～60℃，酶解时间为30～210分钟；酶解结束后调pH值至3.0～4.0，按每公斤江蓠藻粉加入10～20万国际单位比活力的蛋白酶进行酶解，搅匀后，维持pH值在3.0～4.0，45℃～50℃的条件酶解，酶解时间为450～510分钟，酶解结束后加热至90℃～100℃进行酶灭活，酶灭活时间为5～20分钟；

(3)、降至室温，过滤，收集滤液；对滤液调节pH值至5.5～7.0；加入95％的乙醇至乙醇的体积浓度为10％～20％，室温静置3.0小时以上； 

(4)、离心，过滤，收集滤液，加入95％乙醇醇沉至乙醇的体积浓度为40％～80％，室温静置3.0小时以上； 

(5)、醇沉后的溶液过滤，取沉淀物，沉淀物分别用95％乙醇和丙酮洗2次，真空干燥，即得江蓠多糖。 

该制备方法还包括以下步骤： 

(6)、取步骤(5)所制得的江蓠多糖，加入10倍量以上的水搅拌进行溶解，离心，过滤，取过滤液； 

(7)、将过滤液用DEAE层析柱进行层析分离，用10～30mmol/L，pH5.5～7.0磷酸盐缓冲液进行洗脱； 

(8)、收集层析分离后的目标物，用截留分子量为5～100KD的超滤膜进行超滤，收集截留液； 

(9)、截留液加入95％乙醇醇沉至乙醇的体积浓度为40％～80％，室温静置3.0小时以上； 

(10)、醇沉后的溶液进行离心，过滤，沉淀分别用95％乙醇和丙酮洗2次，进行真空干燥，即得江蓠多糖。 

所述步骤(1)还包括有：滤渣加入4倍重量以上的水进行酶解提取，按每公斤江蓠藻粉加入10～30万国际单位比活力的复合酶进行酶解，所述复合酶含有重量比为2～1∶1～2的纤维素酶和半纤维素酶；维持pH值在3.0～5.5，酶解温度为30℃～60℃，时间为60～250分钟；酶解结束后加热进行酶灭活，酶灭活温度为90℃～100℃，酶灭活时间为5～20分钟，降温，过滤，得滤液②；所述步骤(2)中裂解酶酶解的为滤液①和滤液②的合并滤液。 

所述步骤(2)中的裂解酶为褐藻胶裂解酶、海藻酸裂解酶、果胶酸裂解酶 或果胶酸酯裂解酶。 

所述的步骤(3)中过滤包括，先用滤布进行粗过滤，再用高速冷冻离心机进行离心，再进行抽滤。 

所述步骤(6)中的过滤过程为：用高速冷冻离心机离心，倒出上清液，收集沉淀至容器中，用95％的乙醇来洗，用抽滤器抽干。 

本发明具有的优点：本发明通过对江蓠藻进行酶解处理，经过分级醇沉及酒精醇沉的方法，第一步分离纯化除去其他杂质，再经过DEAE层析柱进行层析分离，然后用分子截留为5～10KD的超滤膜进行超滤，收集截留液，再经过酒精醇沉，第二步分离纯化除去其他杂质。这种方法的优点如下： 

1、江蓠藻直接经酶解等生产工艺提取江蓠藻多糖，具有简单、安全、环保、低成本等优点。 

2、本发明的制备江蓠藻多糖的方法所制备的江蓠藻多糖纯度高，收率高，成色好，可大量生产等优点。