[发明专利]一种苹果多酚抑菌临界浓度的简易测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种利用热活性检测仪测定苹果多酚抑菌浓度临界值的简易方法。

背景技术

苹果是我国四大水果之首，是人们食用多酚类物质的主要来源。“One apple a day keeps doctor away”这句俗语充分说明了苹果的功效，而苹果多酚是苹果中的一大类具有强大生理 功能的物质，苹果多酚是苹果中所含多元酚类物质的总称，在一些酿酒苹果品种中其含量高 达7g/kgFW(鲜重计)，普通的鲜食品种中含量范围在0.5～2g/kgFW(鲜重计)。多酚包括原花青 素类、黄酮醇类(槲皮苷配糖体)、羟基肉桂酸类、儿茶素类、花青素类和二氢查耳酮类(根 皮苷配糖体)等，其主要多酚化合物结构式如图1(图1是苹果果实中主要多酚化合物分子 结构式)所示。

苹果中多酚的主要成分因品种、成熟度以及组织部位的不同而不同。成熟苹果的主要多 酚类为儿茶素、原花青素及绿原酸类，而未成熟苹果中则含有较多的二氢查耳酮、黄酮醇类 化合物。

大量的研究表明苹果多酚具有多种药理功能如抗癌、抗氧化、抗动脉硬化、保护软骨与 增强骨质、生发与乌发、保护视网膜、抗视力退化、抗菌、抗病毒、抗过敏、防龋齿、防辐 射、防治冠心病与中风等心脑血管疾病。

目前，国内外对苹果中多酚物质的研究主要集中在苹果汁加工过程中酚类物质的分析及 其对果汁品质的影响，而对其抑菌作用的研究较少，目前主要采用牛津杯法、圆片滤纸法进 行抑菌试验，确定抑菌最低浓度，但其稳定性差、灵敏度和准确度较低、不宜推广。为此必 须寻找一种能快速、高效、灵敏的测定苹果多酚抑菌浓度临界值的简易方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是苹果多酚临界抑菌浓度难以确定的难题，采用热活性检测仪 提供了一种苹果多酚抑菌浓度临界值的简易测定方法。本方法适用于不同工艺条件制备的苹 果多酚粗提物，与传统的抑菌实验方法如牛津杯法、圆片滤纸法相比具有直观、快速、量化、 重现性好，自动化程度高等优点。其原理如下：

细菌在生长代谢的指数生长期内，数量按指数规律增长，其数学表达式为：

n_t＝n₀e^k(t-to)         (1)

式中，t为指数生长期开始后的某一时间，t₀为指数生长期开始的时间，n_t和n₀分别为t 和t₀时细菌的数目。假设每个细菌在代谢过程中的热输出功率(w)相同，则

n_tw＝n₀we^k(t-to)                        (2)

令P_t＝n_tw；P₀＝n₀W，则P_t＝P₀e^k(t-to)    (3)

或lnP_t＝lnP₀-kt₀+kt    (4)

(3)式和(4)式中P_t为细菌生长热谱中指数生长期内t时刻的热功率，k就是细菌在指定 条件下的生长速率常数，它的大小实际上就代表了细菌在指定条件下细菌生长代谢速率的快 慢。

如果从细菌生长热谱曲线中的指数生长期内取一系列ln P_t～t数据，以1n P_t对t作图， 由直线斜率可得生长速率常数k。本文计算出不同浓度C的药物作用下细菌的生长速率常数， 用CurveExpert拟合出k-C关系曲线，从而求出细菌不生长k＝0时的用药浓度C₀，即临界生 长用药浓度。

本发明的技术方案包括如下步骤：

首先将苹果多酚采用10％甲醇配成浓度为10mg/mL的溶液。

无菌操作下，用微量移液器取已灭菌的液体培养基1mL，放于无菌的安培瓶中，作为比 较体系。

取一只装有10mL液体培养基的试管，接入菌种，摇匀，然后取1mL此接种培养基，放入 另一无菌的安培瓶中，作为研究体系。

将2支安培瓶放入热活性检测仪中，预热30min，记录热谱图曲线，待曲线返回基线后， 实验结束。