[发明专利]绿豆黄色花叶病印度病毒(MYMIV)的嵌合构建体和其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域。更特别地，本发明涉及绿豆黄色花叶病印度病毒(Mungbean Yellow Mosaic India Virus，MYMIV)毒性克隆的构建体和其用途。

背景技术

绿豆黄色花叶病的特征是被感染植物的叶上具有亮黄色花斑，该疾病造成绿豆(Vigna radiata)作物的大量损失。黄色花叶病是五种重要豆类作物的主要危害：黑吉豆(Black gram)、绿豆、菜豆(French bean)、木豆和大豆。其造成每年约3亿美元的损失。大豆是一种主要的豆类作物。取决于严重程度，其高度易患黄色花叶病并造成21-86％的产量损失。经鉴定，该疾病的病原体为绿豆黄色花叶病印度病毒(MYMIV)，其是双粒病毒组和菜豆金色花叶病毒属(Begomoviruses)家族的成员。在印度，该病毒通过粉虱传播。该疾病的症状包括小的黄色散在的斑点，该斑点的融合使得叶完全变黄。新生的叶显示黄色花斑和斑纹。

与大多数二连的双粒病毒相似，MYMIV的遗传物质为两条单链共价闭环DNA。该DNA被命名为DNA-A和DNA-B，每个约2.7kb的大小。DNA A主要编码4个蛋白，所述蛋白在复制和转录两种DNA成分中起重要的作用。DNA B只编码两个蛋白，所述蛋白帮助病毒颗粒的移动。它们在成熟植物细胞细胞核中通过双链DNA中间物复制。

为了研究许多这些二连菜豆金色花叶病毒的生物学过程，为了筛选群体中的抗性品种，需要用病毒感染植物。为了这一目的，已经开发了许多感染方法，如(1)在粉虱(烟粉虱(B.tabaci))的帮助下从被感染的植物传播至未感染植物，(2)向健康植物机械接种来自被感染植物的纯化病毒或病毒DNA二聚体，及(3)接种具有在Ti质粒中的DNA A和DNA B的部分或完整二聚体的农杆菌属混悬剂。

粉虱介导的接种是用于感染植物的最早方法。但是一些重要的二连菜豆金色花叶病毒不能通过粉虱传播至其他宿主，并且感染的频率低，因为其取决于粉虱。另外，保存纯的含有病毒的粉虱储存液是非常不方便的和有害的；完全可控制地将昆虫引入植物是困难的。在粉虱介导的感染中，筛选种子种群也不是完全可靠的；因为抗性可针对粉虱本身产生(Grimsley，N.，Hohn，B.，Hohn，T.和Walden，R.(1986).“Agroinfection”，an alternative route for viral infection of plants by usingthe Ti plasmid.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：3282-3286)。

为了克服使用昆虫载体进行病毒接种的困难，早期研究中也测试了机械方法。这些方法包括通过机械损伤向未感染的植物接种纯化病毒或DNA A和B的二聚体(Etessami，P.，Callis，R.，Ellwood，S.，Stanley，J.，(1988).Delimitation of essential genes of cassava latent virusDNA 2.Nucleic Acid Res.16，4811-4829)。在少数植物如番茄中，可通过使用这些方法获得100％的感染。但是结果不乐观。对于不能通过机械传播的其它病毒如玉米条纹病毒、甜菜曲顶病毒和南瓜叶卷曲病毒，需要有效的感染方法(Stanley，J.，Markham，P.G.，Callis，R.J.，Pinner，M.S.，(1986).The nucleotide sequence of an infectious clone of thegeminivirus beet curly top virus.EMBO J.5，1761-1767)。