[发明专利]通过质谱法检测二羟基维生素D代谢物的方法

权利要求书

1.通过串联质谱法测定样品中一种或多种二羟基维生素D代谢物的量的方法，其包括：

(a)从所述样品中免疫纯化所述二羟基维生素D代谢物；

(b)通过HPLC进一步纯化来自步骤(a)的免疫纯化的二羟基维生素D代谢物；

(c)通过串联质谱法测定从步骤(b)获得的维生素D代谢物的量，其包括：

(i)产生所述一种或多种二羟基维生素D代谢物的前体离子；

(ii)产生所述前体离子的一个或多个碎片离子；和

(iii)检测步骤(i)或(ii)或两者中产生的一种或多种所述离子的量并且将检测的离子关联到所述样品中的所述一种或多种二羟基维生素D代谢物的量。

2.权利要求1的方法，其中所述免疫纯化步骤利用免疫颗粒。

3.权利要求2的方法，其中所述免疫颗粒包括抗二羟基维生素D抗体。

4.权利要求1-3的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物没有经历衍生。

5.权利要求1-3的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物在质谱法之前进行衍生。

6.权利要求5的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物在质谱法之前用4-取代的1，2，4-三唑啉-3，5-二酮(TAD)进行衍生。

7.权利要求5的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物在质谱法之前用4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮(PTAD)进行衍生。

8.权利要求5的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物在质谱法之前用4’-羧苯基-TAD进行衍生。

9.权利要求1-8的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α，25(OH)₂D₂。

10.权利要求1-8的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α，25(OH)₂D₃。

11.权利要求1-10的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α，25(OH)₂D₂和1α，25(OH)₂D₃并且其中所述代谢物的所述量在单一测试中进行测定。

12.权利要求1-3、5、6和9-11的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α，25(OH)₂D₂；其中所述1α，25(OH)₂D₂在质谱法之前用4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮(PTAD)进行衍生；并且其中所述1α，25(OH)₂D₂的所述前体离子的质/荷比为586.37±0.5。

13.权利要求12的方法，其中所述一种或多种碎片离子包括质/荷比314.12±0.5的离子。

14.权利要求1-3、5、6和9-13的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α，25(OH)₂D₃；其中所述1α，25(OH)₂D₃在质谱法之前用4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮(PTAD)进行衍生；并且其中所述1α，25(OH)₂D₃的所述前体离子的质/荷比为574.37±0.5。

15.权利要求14的方法，其中所述一种或多种碎片离子包括质/荷比314.12±0.5的离子。

16.权利要求1-4和9-11的任一项的方法，其中所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α，25(OH)₂D₂；其中所述1α，25(OH)₂D₂在质谱法之前进行衍生；并且其中所述1α，25(OH)₂D₂的所述前体离子的质/荷比为411.35±0.5。